小鼠肾细胞分离：一种分离与原代培养肾小管上皮细胞的技术

摘要

来源：Ding, W. 等. 小鼠原代肾小管上皮细胞的分离、鉴定及高通量细胞外通量分析。 J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们演示了分离和纯化肾小管上皮细胞的步骤，适用于多种分子生物学和细胞培养研究。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 组织处理与原代小管细胞的分离

1. 去除肾包膜和髓质，将两个肾脏切成微小碎片，加入10 mL消化缓冲液，在37 °C培养箱中轻轻旋转孵育5分钟。
2. 将缓冲液通过70 μm滤膜以去除未消化的肾组织，加入10 mL培养基以终止消化反应。
3. 为收集肾小管细胞，将滤过的细胞悬液在50 ×g条件下离心5分钟，收集第一个沉淀。将上清液转移至新管中，加入5 mL培养基，再次在50 × g条件下离心5分钟，以确保所有肾小管细胞被收集到第二个沉淀中。该低速离心主要用于沉淀较重的肾小管结构。后续在细胞从分离状态恢复后，传代培养时会采用较高速度离心纯化的肾小管细胞。
4. 将第一个沉淀重悬于20 mL培养基中，并在50 ×g条件下离心5分钟，收集第三个沉淀。
5. 将第二和第三个沉淀重悬于1 mL培养基中。取10 µL细胞悬液与10 µL台盼蓝混合，将混合液加入计数载片的A室，通过自动细胞计数仪记录细胞活力。
6. 将最多10⁷ 个细胞（异质性群体）接种至预先用胶原蛋白包被的单个60 mm培养皿中，过夜培养以使肾小管细胞贴壁。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
大鼠尾部I型胶原蛋白	ThermoFisher Scientific	A1048301
II型胶原酶	Worthington	LS004176
肾上皮细胞生长培养基2试剂盒	PromoCell	C-26130
TC10全自动细胞计数仪	Bio-Rad	506BR2119