高碘酸希夫或 PAS 染色:一种评估肾小球结构畸形的方法

1. 高碘酸希夫 （PAS） 染色剂

注意:PAS 染色将突出显示肾小球毛细血管袢的基底膜和肾小管上皮。它能够详细可视化肾小球细胞、系膜基质和电位扩展以及 GBM 的潜在变化（即增厚和不规则）。

1. 使用 5 μm 厚的切片机将石蜡包埋、PFA 固定的肾皮层切片到聚-L-赖氨酸包被的载玻片上。在 37 °C 下干燥 1 小时。确保切片不包含任何折叠或孔洞，这可能会在显微镜下扭曲形态。
在
2. 室温下，在二甲苯（注意，刺激性;在通风柜中使用）中孵育两次，每次 3 分钟，在 100% 乙醇中孵育两次，每次 3 分钟，然后在 95%、70% 和 50% 乙醇中孵育一次，每次 3 分钟，使玻片脱蜡。在 dH₂O 中再水化载玻片。
3. 将玻片在过碘酸溶液（注意，刺激性;在通风柜中使用）（1 g/dL）中孵育 5 分钟，然后在 dH₂O 中多次更换冲洗玻片。在室温下使用 100 mL dH₂O 的容器。
4. 在室温下，将玻片在 Schiff 试剂（盐酸对苯胺 6 g/L 和 4% 焦亚硫酸钠的 HCl 0.25 mol/L 溶液）中孵育 15 分钟。在流动的自来水中洗涤玻片 5 分钟。
5. 用苏木精复染 3 秒，然后在流动的自来水中彻底冲洗玻片 15 分钟。
   注意:可能需要进行一些优化以确定苏木精染色的最佳时间。
6. 使用脱蜡方案的相反方法脱水玻片。用二甲苯完成。
7. 风干玻片并使用二甲苯基封片剂进行封片。
8. 在光学显微镜上以 400 倍放大倍率成像以评估肾小球结构。评估以下内容:GBM 增厚和不规则、毛细血管袢塌陷、纤维化组织、硬化、细胞增殖（内皮细胞、足细胞和系膜或炎性细胞浸润簇><）。 注意:为了全面评估肾小球病理生理学，应评估肾脏其他部位的病变，例如肾小管中的病变。