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1. 细胞植入
要在肾内植入 Renca 细胞，请在 Hank 平衡盐溶液 （HBSS） 中以 2 x 106 个细胞/mL 的浓度将 Renca 细胞制备到单细胞悬液中。
- 使用 HBSS 中的 0.25% 胰蛋白酶从组织培养瓶中去除贴壁的 Renca 细胞。~5 分钟后，向培养瓶中加入完全 RPMI 以中和胰蛋白酶，并将细胞转移到离心管中进行洗涤。在 25 °C 下以 300 相对离心 g 力 （rcf x g） 离心细胞 5 分钟。
- 倒出上清液并将细胞重悬于 HBSS 中。使用血细胞计数器对细胞进行计数，并用 HBSS 调节体积以产生 2 x 106 个细胞/mL。
- 将细胞吸入装有 18 号针头的 1 mL 注射器中，以防止细胞受到剪切应力。在注射肿瘤细胞之前，用 18 号针头更换 28 号针头。注射 0.1 mL 将 2 x 105 个细胞输送到肾脏中。
2. 手术区域准备
- 通过在加热垫上放置无菌手术单，在生物安全柜中准备无菌手术区域。收集所有用品，包括镊子、手术刀、剪刀、滴眼液、5% 聚维酮碘消毒剂和无菌纱布。使用前对所有仪器进行高压灭菌。
- 使用无菌尖端技术进行手术。使用珠子灭菌器对动物之间的器械进行再消毒。戴无菌手套、穿实验服和戴口罩。
3. 动物准备
- 根据机构指南，用氯胺酮/甲苯噻嗪（分别为 87.5 mg/kg 和 12.5 mg/kg，ip）麻醉小鼠。通过执行脚趾捏来确定麻醉深度。
- 当动物被认为没有反应时，通过拔 （用手指） 或剃须 （使用剪子） 皮毛来准备 Balb/c 小鼠的注射部位（例如，左侧）。
- 将小鼠从手术准备区域（例如，笼子）移动到手术区域，并在眼睛上涂抹兽医软膏以防止干燥。用 5% 聚维酮碘消毒剂充分擦拭准备好的切口部位。
- 将盐酸布比卡因（0.1 mL 2.5 mg/mL 溶液，sc）注射到将要做切口的区域作为术前镇痛。
- 使用无菌手术刀或剪刀小心地在动物的左侧侧面做一个切口（~1.0 至 1.5 厘米），以免穿透腹膜。用无菌剪刀将真皮与腹膜分开。用无菌棉纱布轻拍切口部位以去除任何血液。
- 双手握住鼠标，用左手握住头部，用右手支撑侧翼。
- 通过腹膜识别脾脏，然后用右手的一根手指从下面触诊小鼠;现在应该通过腹膜可以看到肾脏。牢牢抓住动物，在腹膜和肾脏中提供张力。
- 让第二个人使用装有 1 号针头的 1 mL 注射器将肿瘤细胞（在第 1.2 节中制备）通过完整的腹膜注射到肾脏中心。缓慢输送 0.1 mL （2 x 105） 细胞。注射细胞后，将针头固定 5-10 秒以减少细胞回流。重要的是要注意在此步骤中需要格外小心，因为注射细胞的人会将针头靠近拿着鼠标的人的手指。
- 取下针头并用一层薄薄的氰基丙烯酸酯组织粘合剂闭合切口。
- 用无菌纸巾将动物放回干净的笼子中。让动物在加热垫上恢复。在恢复期间，不要让动物无人看管。在动物直立和胸骨之前，不要将动物放回标准饲养条件。在使用实验动物的所有程序中遵循机构指南。