向斑马鱼胚胎静脉内微量注射肾毒素：一种将肾毒性物质递送至斑马鱼胚胎血液循环的技术

摘要

来源：McKee, Robert A. 等. 利用斑马鱼肾毒素微量注射建立急性肾损伤模型. J. Vis. Exp. (2016)

本视频演示了将肾毒素通过尾静脉显微注射到斑马鱼胚胎体内的方法，以研究这些化学物质对肾脏功能的影响。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 溶液的配制

1. 通过将73.0 g NaCl、3.15 g KCl、9.15 g CaCl₂ 和9.95 g MgSO₄ 溶于5 L蒸馏水中，配制50倍浓缩的E3胚胎培养基，并在室温下保存。
2. 通过将73.0 g NaCl、3.15 g KCl、9.15 g CaCl₂ 和9.95 g MgSO₄ 溶于5 L蒸馏水中，配制50倍浓缩的E3胚胎培养基，并在室温下保存。
3. 培养斑马鱼胚胎时，将50倍浓缩的E3胚胎培养基用蒸馏水稀释至1倍工作液，然后每1 L 1倍E3培养基中加入200 μl 0.05%亚甲蓝作为杀菌剂，并在室温下保存。
4. 通过将40 mL 50倍浓缩E3培养基与0.06 mg PTU（1-苯基-2-硫脲）混合，配制含0.003% PTU的色素抑制E3胚胎培养基，再用蒸馏水定容至2 L。
5. 在室温下搅拌E3/PTU溶液过夜，使PTU粉末充分溶解，然后将E3/PTU溶液于室温保存。
   注意：E3/PTU溶液的有效期约为一周，存放时间较长的溶液在抑制斑马鱼幼体色素发育方面的效果会降低。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯化钠	American Bioanalytical	AB01915
氯化钾	American Bioanalytical	AB01652
硫酸镁	Sigma-Aldrich	M7506
氯化钙	American Bioanalytical	AB00366
N-苯基硫脲（PTU）	Aldrich Chemistry	P7629
氨基苯甲酸乙酯（Tricaine）	Fluka Analytical	A5040
硼硅酸盐玻璃	Sutter Instruments Co.	BF100-50-10
Flaming/Brown 微量移液器拉制仪	Sutter Instruments Co.	Mo. P097
UltraPure 琼脂糖	Invitrogen	15510-027
Falcon 一次性培养皿，无菌，Corning：
60 mm × 15 mm	VWR	25373-085
100 mm × 15 mm	VWR	25373-100
微量注射用托盘 150 mm × 15 mm	VWR	25373-187
低温培养箱	Fischer Scientific	11 690 516DQ
显微解剖镊	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5010
千分尺	Ted Pella, Inc.	2280-24