从小鼠肾小球中吸取液体：一种利用双光子介导显微穿刺从小鼠肾小球吸取肾小球液的方法

摘要

来源：Matsushita, K. 等. 利用双光子显微镜辅助小鼠肾小囊穿刺技术. J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了利用双光子介导的微穿刺技术从小鼠肾小球中抽取液体。该技术可进入活体小鼠的肾小球，从而有助于深入了解肾脏生理学。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 通过一种新型手术方法在液体成像柱下方经侧向移液管通路进入肾脏

注意：成像支撑系统和手术准备的组装如图1所示。所述操作在体重为20–25 g的C57BL/6小鼠上进行。

1. 称量小鼠体重。
2. 使用4%异氟烷诱导麻醉，并以空气/氧气混合气体中1.5–2.5%异氟烷维持麻醉。通过检测对疼痛刺激无反应及呼吸频率降低来确认小鼠已处于麻醉状态。
3. 润滑小鼠眼睛，将其侧卧固定于基板上，使用胶带固定四肢。
4. 皮下注射200 µL生理盐水，并插入直肠温度探头。手术期间使用加热灯、成像期间使用加热垫控制体温。
5. 使用脱毛膏去除小鼠左侧体表的所有毛发。
6. 定位脾脏（皮下可见），并在脾脏背侧和尾侧定位左肾。
7. 在皮肤上做0.5 cm切口，在腹膜上做较小切口，大小以足以使肾脏顺利突出为宜。
8. 轻柔施压使肾脏外露。将由聚硅氧烷制成的肾脏稳定模具置于肾脏周围，并用氰基丙烯酸酯胶水固定。对齐肾脏与间隔器，使肾脏最外侧表面超出稳定器约1 mm。
9. 用胶水将头板固定在稳定模具上，并将头板安装至基板上的....

结果

图1：使用定制支撑和固定装置进行肾脏部分外推以实现侧向入路。 左侧显示成像柱和肾脏支撑部件的组成部分，中间为完整组装结构。右侧显示应用支撑装置前（上方）和应用后（下方）的肾脏制备状态。

图 2：完成肾脏制备，处于实验方.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
直立式双光子显微镜	Zeiss	LSM 7MP
三轴显微镜载物台控制器	Sutter	MP-285
三轴探头控制器	Sutter	MP-225
移液管固定器	Molecular Devices	1-HL-U
探头	Molecular Devices	CV203BU
异硫氰酸荧光素标记葡聚糖，分子量 2000 kDa	Sigma-Aldrich	52471-1G
硼硅酸盐玻璃毛细管	Sutter	B150-110-7.5
微量移液管拉制仪	Sutter	P-97
量子点，发射波长 605 nm	Thermofisher	Q21701MP
聚硅氧烷	Sugru		www.sugru.com, "original formula"。任意颜色。
PE-50 导管	Instech Labs	BTPE-50
微量注射器	WPI	UMP-3
微量注射控制器	WPI	Micro4
全氟十氢萘	Sigma-Aldrich	306-94-5
琼脂糖	Sigma-Aldrich	9012-36-6
盖玻片，10 mm	Harvard Apparatus	64-0718
头固定板	定制		神经科学实验室中常见，多家供应商可提供
头部固定装置	定制		神经科学实验室中常见，多家供应商可提供
30G 针头	Becton-Dickinson	125393	用于眶后注射
结核菌素注射器	Becton-Dickinson	309626	用于眶后注射