小脑延髓池手术注射：一种将肿瘤细胞直接注入小鼠中枢神经系统的方法

摘要

来源：Law, V. 等。 一种用于研究软脑膜疾病直接靶向治疗的小鼠奥马耶异种移植模型。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们介绍了将人源性肿瘤细胞注入小鼠脑池（cisterna magna）的操作步骤。该原位小鼠模型可用于研究癌症向颅脑脑膜的转移扩散过程。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 循环肿瘤细胞的制备

1. 计算注射所需的循环肿瘤细胞（CTC）数量，并在无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中制备浓度为 1.0 × 10⁴ 个细胞/μL 的单细胞悬液。整个操作过程中将细胞悬液置于冰上或 4 °C 保存。
   注意：若使用的细胞系需要胰酶消化，请务必用无菌 PBS 洗涤细胞两次以去除胰酶。使用血细胞计数板或自动细胞计数仪进行细胞计数。若使用较大规模的动物群体（>50 只小鼠），应在每次注射之间重新计数细胞并验证细胞活力，以确保每只小鼠接受的细胞数量一致。

2. 术前准备

1. 皮下注射布托啡诺缓释剂（Bup-SR），剂量为 5 mg/kg。
   注意：避免在预定切口区域注射；选择远离肩胛骨的注射部位。
2. 使用 2–3% 异氟烷对小鼠进行麻醉，直至其失去翻正反射。此外，通过检查尾部和/或足垫夹捏反射来确认麻醉状态。
3. 在远离手术区域的位置为小鼠准备手术。剃除手术部位（即颅骨背侧）及其周围足够范围的毛发，以防止毛发污染切口区域；然后使用杀菌性皮肤消毒剂由中....

结果

图1：在小鼠异种移植模型中将循环肿瘤细胞注射至小脑延髓池以研究软脑膜疾病及中枢神经系统转移。（A）示意图显示小脑延髓池的位置及脑脊液穿刺注射部位，使用Hamilton注射器将CTC注入该部位。（B）注射循环肿瘤细胞2周后，发展出软脑膜疾病及中枢神经系统转移（脑部及沿脊髓分布）的小鼠代表性IVIS成像图。细胞标记有荧光素酶报告基因。注射生理盐水的对照组动物未形成肿瘤（n = 3），实验重复三次。缩写：CTCs = 循环肿瘤细胞；IVIS = 活体成像系统。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
珠粒灭菌器 	Braintree Scientific Inc. (或任意供应商) 	#GER 5287-120V 	Germinator 500
缓释布托啡诺（Bup-SR） 	Zoopharm 		美国药品执法局（DEA）管制药品
Hamilton 微量注射器&nbsp;	Hamilton&nbsp;		10、25、50 和 100 &mu;L；<br/> 小脑延髓池注射使用 30G 针头
磷酸盐缓冲液（PBS）&nbsp;	任意供应商		0.1 mm 无菌过滤
啮齿类动物外科手术器械（剪刀、镊子）	Roboz Surgical Instrument（或任意供应商）
无菌蓝色纸巾/铺巾&nbsp;	任意供应商
无菌棉签&nbsp;	任意供应商