1. 准备荧光素酶标记的GSCs
<ol>
	<li>从GSCs培养物开始，在室温下以70 ×&#160;g&#160;离心3分钟。</li>
	<li>弃去上清液，加入accutase在37 °C消化细胞4分钟。使用200 µL枪头反复吹打，以解离并重悬细胞沉淀。</li>
	<li>将细胞稀释至每孔2 × 105&#160;个细胞，接种于12孔培养板中，过夜培养。</li>
	<li>向每孔加入30 µL荧光素酶-EGFP病毒上清液（滴度&gt;108&#160;TU/mL），然后在25 °C下以1,000 ×&#160;g&#160;离心2小时。继续培养细胞过夜。</li>
	<li>次日更换新鲜培养基，再继续培养48小时。</li>
	<li>在荧光显微镜下观察细胞，确认出现GFP阳性细胞。</li>
	<li>使用流式细胞分选仪分选并筛选出GFP荧光强度高的GSCs，进行后续培养。</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>B-27</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>50X</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Gibco</td><td>PHG0313</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>FGF</td><td>Gibco</td><td>PHG0263</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>Gluta Max</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>100X</td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>1X</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td>P: 10,000 单位/ml&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; S:&amp;nbsp; 10,000 ug/ml</td></tr><tr><td>丙酮酸钠</td><td>Gibco</td><td>2088876</td><td>100 mM</td></tr></tbody></table>

荧光素酶标记的胶质瘤干细胞模型：一种慢病毒介导的体外治疗研究用荧光素酶标记胶质瘤干细胞的制备方法

Luciferase-tagged Glioma Stem Cell Model: A Lentivirus-mediated Method to Prepare Luciferase-tagged Glioma Stem Cells for In Vitro Therapeutic Studies

来源：Hu, Z. 等. <a href='https://www.jove.com/v/62312/a-rapid-screening-workflow-to-identify-potential-combination-therapy'>利用患者来源的胶质瘤干细胞快速筛选潜在联合治疗方案的工作流程</a>。 J. Vis. Exp. (2021)
本视频展示了通过慢病毒介导的基因递送方法建立荧光素酶标记的胶质瘤干细胞。荧光素酶作为报告基因，有助于快速开展药物筛选实验。

来源：Hu, Z. 等。利用患者来源的胶质瘤干细胞快速筛选胶质母细胞瘤潜在联合治疗方案的工作流程。J. Vis. Exp. ...

胶质瘤干细胞（GSCs）是胶质瘤中的一类细胞亚群，而胶质瘤是一种起源于脑内胶质细胞的癌症。
利用荧光素酶等生物发光酶对这些GSC进行标记，有助于建立高通量成像分析方法，用于药物筛选。
为制备荧光素酶标记的GSCs，首先使用合适的生长培养基培养GSCs细胞。
离心培养物以获得细胞沉淀，并移除上清液。
向沉淀中加入适当的消化酶。这些酶可解离细胞团块，并降解残留的结缔组织，以获得单细胞悬液。
现在，将单细胞悬液离心并弃去上清液。用新鲜培养基重悬沉淀。
接下来，将所需浓度的细胞接种于培养板中。
孵育培养物，使细胞贴附于培养板上。
随后，加入所需滴度的含有荧光素酶增强型绿色荧光蛋白或EGFP基因的病毒载体，并进行孵育。
病毒与GSC表面受体相互作用，触发含有荧光素酶-EGFP的病毒RNA释放。细胞内的酶催化RNA逆转录为双链DNA，并将其整合到GSC的基因组中。
在荧光显微镜下观察时，由于EGFP发出的荧光，表达荧光素酶的细胞呈现绿色。

首先从培养基中收集胶质瘤干细胞（GSCs），在室温下以 70 × g 离心 3 分钟。去除上清液后，在 37 摄氏度下用 accutase 消化细胞 4 分钟。
使用200微升枪头反复吹打细胞，以解离并重悬细胞沉淀。将神经胶质瘤干细胞以每毫升培养基200,000个细胞的密度接种至12孔培养板的每个孔中，并过夜培养。
第二天，向孔板的每个孔中加入 30 微升荧光素酶-EGFP 病毒上清液。在 25 摄氏度下以 1,000 ×g 离心 2 小时，随后过夜培养细胞。
次日，收集GSC细胞，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，重新接种并更换各孔中的培养基。将细胞继续培养48小时。
在荧光显微镜下观察培养板，确认出现GFP阳性细胞。

luciferase-tagged-glioma-stem-cell-model-lentivirus-mediated-method

Research

科研

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

癌症研究

Cancers of the Nervous System

神经系统癌症

In vitro studies

体外研究

荧光素酶标记的神经胶质瘤干细胞模型:一种慢病毒介导的制备荧光素酶标记的神经胶质瘤干细胞用于体外治疗研究的方法

2.8K 次观看. 神经胶质瘤干细胞或 GSC 是神经胶质瘤的一个亚群，神经胶质瘤是大脑中神经胶质细胞的癌症。 用荧光素酶等生物发光酶标记这些 GSC 有助于建立用于药物筛选的高通量成像测定。 要制备荧光素酶标记的GSC，首先在合适的生长培养基中培养GSC。 离心培养物以获得细胞沉淀并除去上清液。 在沉淀中加入合适的消化酶。这些酶解离细胞簇并降解结缔组织的?...

Abstract

1. 准备荧光素酶标记的GSCs
<ol>
	<li>从GSCs培养物开始，在室温下以70 ×&#160;g&#160;离心3分钟。</li>
	<li>弃去上清液，加入accutase在37 °C消化细胞4分钟。使用200 µL枪头反复吹打，以解离并重悬细胞沉淀。</li>
	<li>将细胞稀释至每孔2 × 105&#160;个细胞，接种于12孔培养板中，过夜培养。</li>
	<li>向每孔加入30 µL荧光素酶-EGFP病毒上清液（滴度>108&#160;TU/mL），然后在25 °C下以1,000 ×&#160;g&#160;离心2小时。继续培养细胞过夜。</li>
	<li>次日更换新鲜培养基，再继续培养48小时。</li>
	<li>在荧光显微镜下观察细胞，确认出现GFP阳性细胞。</li>
	<li>使用流式细胞分选仪分选并筛选出GFP荧光强度高的GSCs，进行后续培养。</li>
</ol>

Protocol

<table><tbody><tr><td>B-27</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>50X</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Gibco</td><td>PHG0313</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>FGF</td><td>Gibco</td><td>PHG0263</td><td>20 ng/ml</td></tr><tr><td>Gluta Max</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>100X</td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>1X</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td>P: 10,000 单位/ml&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; S:&nbsp; 10,000 ug/ml</td></tr><tr><td>丙酮酸钠</td><td>Gibco</td><td>2088876</td><td>100 mM</td></tr></tbody></table>

荧光素酶标记的胶质瘤干细胞模型：一种慢病毒介导的体外治疗研究用荧光素酶标记胶质瘤干细胞的制备方法

本文内容

摘要

方案

材料

标签

姓名	公司	目录编号	评论
B-27	Gibco	17504-044	50X
EGF	Gibco	PHG0313	20 ng/ml
FGF	Gibco	PHG0263	20 ng/ml
Gluta Max	Gibco	35050061	100X
Neurobasal	Gibco	21103049	1X
青霉素-链霉素	HyClone	SV30010	P: 10,000 单位/ml S: 10,000 ug/ml
丙酮酸钠	Gibco	2088876	100 mM