基于细胞生物发光的检测方法：一种用于组合药物筛选的高通量技术

本文内容

摘要

在本视频中，我们介绍一种方法，强调利用生物发光检测技术对药物进行灵敏且快速的筛选。这些药物可单独测试，也可联合测试，以评估其作用机制中的协同效应。

方案

1. 基于生物发光的细胞活力检测

用细胞外基质（ECM）混合物（例如 Matrigel）包被培养板：向每个孔中加入 40 µL 浓度为 0.15 mg/mL 的 ECM 混合物，在 37 °C 下孵育 1 小时。去除多余的 ECM 混合物，并用 PBS 轻轻冲洗一次。
向 96 孔光学底板的每个孔中加入 100 µL 含有 15,000、10,000、8,000、6,000、4,000、2,000、1,000 和 500 个 XG387-Luc 细胞的培养基，同时设置加入 100 µL 空白培养基的对照孔，每组设 6 个复孔，并在 37 °C 下过夜培养细胞。
移除上清液，向每个孔中加入含 150 ng/µL D-荧光素酶的 50 µL 培养基，在 37 °C 下孵育细胞 5 分钟。
使用 IVIS Spectrum 成像系统对培养板中的细胞生物发光进行成像。利用内置软件在感兴趣区域（ROI）创建多个圆形区域，并对细胞生物发光信号进行定量分析。

2. 替莫唑胺处理与联合用药筛选

在处理前，按照上述第1步所述方法预先包被四块96孔板。
将XG387-Luc细胞以每孔100 µL培养基中接种1,000个细胞的密度接种至96孔光学底板的各孔中，并过夜培养细胞。
提前从储备液中配制替莫唑胺及靶向药物。为单药处理配制一系列浓度为800 µM、600 µM、400 µM、300 µM、200 µM、100 µM和50 µM的替莫唑胺培养基溶液。分别将替莫唑胺和靶向药物的储备液用培养基稀释，获得用于联合用药筛选的终浓度200 µM和2 µM（材料列表）。
当大多数胶质瘤干细胞贴附于培养板底部时，吸除培养基；为每种处理设置三个技术重复，向各孔加入上述配制好的含替莫唑胺的培养基。
为进行替莫唑胺处理及药物组合筛选，吸除空白培养基，为每种处理设置三个技术重复，向各孔分别加入含200 µM替莫唑胺、或2 µM靶向药物、或两者联合的上述配制培养基。
将所有培养板在37 °C、5% CO₂条件下孵育3天。
移除含药物的培养基，向每孔加入50 µL含150 ng/µL D-荧光素的空白培养基，并在37 °C孵育5分钟。
使用IVIS Spectrum成像系统对培养板中的细胞生物发光进行成像。利用内置软件创建多个圆形感兴趣区域（ROI），并对细胞生物发光强度进行定量分析。

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材料

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