小鼠颅窗植入术：一种用于稳定光学接触小鼠脑区的玻璃盖片植入手术方案 关键词：颅窗植入，小鼠模型，光学成像，玻璃盖片，脑部手术，活体成像

摘要

来源：Alieva, M. 等。侵入性手术活检后脑肿瘤细胞行为的纵向活体成像 J. Vis. Exp.  (2019)

本视频介绍了一种在小鼠模型中植入颅窗的手术方法，以实现对大脑不同区域的稳定光学观测。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 动物医学评审委员会的审核。

1. 肿瘤细胞移植与颅骨成像窗口制备

1. 手术准备
   1. 使用任何品系或性别的成年小鼠（>6周龄），通过腹腔注射氟阿尼酮[神经安定剂] + 芬太尼[阿片类]（0.4 mL/kg）与苯二氮䓬类镇静剂（2 mg/kg），按1:1:2的比例溶于无菌水中进行麻醉。通过夹趾反应评估动物的麻醉状态。
      注意：在本实验方案中，由于所用肿瘤细胞系（GL261）具有相同的遗传背景，因此同时使用了雌性和雄性C57BL/6小鼠。小鼠可维持完全麻醉状态约1.5小时。也可选用吸入式麻醉，例如异氟烷（1.5%–2%异氟烷/O₂ 混合气体）。
   2. 将小鼠固定于立体定位仪上，使用鼻夹和双耳杆固定头部。
   3. 使用加热灯维持小鼠体温。 使用加热灯时应谨慎，也可选用循环水加热垫替代。
   4. 涂抹眼膏以防止小鼠角膜干燥。
   5. 使用锋利剪刀剃除颅骨表面的毛发（从眼睛至颅底的背侧区域），并用70%乙醇对暴露的皮肤进行消毒。 
   6. 用锋利剪刀环形切开皮肤，并用棉签刮除下方骨膜。局部滴加1%利多卡因+1:100,000肾上腺素溶液，作用5....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
25G × 16 mm 皮下注射针头	BD Microlance
可吸收明胶海绵	Pfizer	300600
圆形盖玻片 6 mm	VWR international		Gelfoam
氰基丙烯酸酯胶水	Pattex	631-0168	Pattex Ultra gel
牙科水泥	Vertex Dental		Vertex Self-Curing
钻孔机	Dremel		Dremel 3000（牙科钻可能更方便）+ 105 雕刻刀头
精细弯头镊子	Dumont
硅油	Sigma Aldrich	AGT508
立体定位仪	Stoelting	181838
手术体视显微镜	Olympus		实验室标准立体定位仪，适用于大鼠和小鼠
眼科软膏	Kela Veterinaria		Duodrops veter kela 10 m
利多卡因（1% 利多卡因 + 1:100,000 肾上腺素）局部麻醉剂	Astrazeneca		Xylocaine (Lidocaine 1% + Epinephrine 1:100,000)
Hypnorm	VetaPharma Ltd		Hypnorm（柠檬酸芬太尼 0.315 mg/mL + 氟哌啶醇 10 mg/mL）
咪达唑仑	Actavis		咪达唑仑 Actavis 5 mg/mL