从外周血单个核细胞（PBMNCs）生成诱导性神经干细胞（iNSCs）：一种基于仙台病毒的将PBMNCs重编程为iNSCs的操作流程

本文内容

摘要

本视频展示了利用仙台病毒将外周血单个核细胞（PBMNCs）重编程为诱导性神经干细胞（iNSCs）的方法。仙台病毒是一种非整合型病毒，可作为一种高效且安全的细胞重编程载体。

方案

1. 通过SeV感染将外周血单个核细胞重编程为诱导性神经干细胞

溶液与培养基的制备
1. 通过将100 mg多聚-D-赖氨酸（PDL）溶于100 mL H₂O 至浓度为 1 mg/mL。在 -20 °C 下以 1 mL 分装保存。
2. 将100 mg胰岛素溶解于20 mL 0.01 N HCl中，配制成5 mg/mL的胰岛素储备液。分装为每份1 mL，于-20 °C保存。
3. 配制 200 mL iNSC 基础培养基，需混合 96 mL DMEM-F12 和 96 mL 基础培养基（材料表加入2 mL 100倍谷氨酰胺储存液、2 mL非必需氨基酸（NEAA）、2 mL N2添加剂和2 mL B27添加剂。使用前添加10 ng/mL重组人白血病抑制因子、3 μM CHIR99021和2 μM SB431542。过滤培养基并于4 °C保存。
  注意： 在2周内使用该培养基。使用前立即加入重组人白血病抑制因子、CHIR99021和SB431542。
通过SeV感染将外周血单个核细胞重编程为诱导性神经干细胞
1. 使用前对超净台进行紫外线灭菌。用75%酒精对所有表面和设备进行消毒。所有枪头通过高....

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材料

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