荧光分子断层成像：一种用于小鼠模型中荧光蛋白标记的胶质母细胞瘤异种移植体的活体成像技术

摘要

来源：Benitez, J. A. 等，活体成像胶质母细胞瘤异种移植模型的荧光分子断层成像技术，J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们介绍了用于在小鼠模型中对表达荧光蛋白标记的胶质母细胞瘤异种移植瘤进行活体成像的荧光分子断层成像技术（FMT）。该技术有助于在分子水平上阐明抗肿瘤治疗药物的作用效果。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. FMT 成像

注意：根据实验目的，可在治疗前、治疗中或治疗后对表达iRFP标记的胶质母细胞瘤细胞进行活体监测。为进行成像，使用异氟烷诱导舱麻醉动物，在扫描期间将其固定于成像盒中，并在FMT成像仪的对接站中进行成像。

1. 将动物从笼中取出，放入异氟烷诱导室。关闭诱导室，开启氧气流量和蒸发器至3–5%。
2. 监测动物直至其完全麻醉，通常在1–2分钟内完成。无意识的动物对外界刺激不应有反应。
3. 将已麻醉的动物从诱导室中取出，将其放入成像盒中，先放置头部适配器，然后使动物呈俯卧位。确保头部位于成像盒中心位置。
4. 将成像盒上盖板盖上，并拧紧调节旋钮至17 mm。
5. 当动物在成像盒中固定稳妥后，将成像盒插入FMT成像仪的内部对接站，开始成像，对接站会持续输送异氟烷以维持动物麻醉状态。
6. 通过双击软件图标启动成像仪和分析软件。
7. 在“实验”选项卡窗口中，选择“数据库”和“研究组”。
8. 进入“扫描”选项卡窗口，点击“选择受试对象”以选定待成像的动物。同时在“激光通道”面板中选择相应的激光通道：对于FP635标记的细胞，选择“激光通道635 nm”；对于FP720标记的细胞，选择“激光通道680 nm”。
9. 在“扫描”选项卡窗口中点击“捕获”以获取图像。然后在所获图像中通过点击并拖动扫描区域，调整扫描场至预定数量的光源位置，通常对同侧设置20–25个光源。
10. 勾选“添加到重建队列”选项，然后点击“扫描”按钮。
11. 等待扫描完成后，将成像盒从对接站中取出。
12. 取下成像盒的上盖板，将动物放回笼中。
13. 对剩余动物重复步骤1.1–1.12。

2. 图像分析

1. 在成像仪和分析软件中，选择“分析”选项卡窗口。
2. 在“分析”选项卡窗口的“数据集选择”面板中，点击“+”按钮，加载待分析的数据集和受试对象。
3. 当图像在“分析”选项卡窗口中加载完成后，通过点击该窗口左上角的椭球图标，执行感兴趣区域（ROI）分析。
4. 在“分析”选项卡窗口中，右键点击“统计信息”面板中的“阈值”列，将阈值调整为零。
5. “统计信息”面板中的总值代表植入小鼠脑内的荧光标记胶质母细胞瘤细胞所产生的信号。
6. 对其他动物重复步骤 2.2–2.4。在“分析”选项卡窗口的“数据集选择”面板中，分别点击“+”或“−”按钮，以加载或移除新的受试对象。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
荧光断层成像系统	PerkinElmer	FMT 2500 XL
TrueQuant 成像软件	Perkin Elmer	7005319
裸鼠（无胸腺裸鼠）	Charles River Laboratories	品系编号 490（纯合子）	需事先获得机构 动物护理项目以及 机构生物安全委员会 的批准。