脑肿瘤干细胞（BTSC）神经球侵袭实验：一种用于分析药物处理对神经球来源BTSC侵袭影响的体外实验方法

摘要

来源：Restall, I. 等。用于研究胶质母细胞瘤脑肿瘤干细胞迁移与侵袭的活细胞成像实验。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了体外脑肿瘤干细胞（BTSC）侵袭实验，通过活细胞成像技术测定药物处理对神经球来源的BTSC侵袭能力的影响。

方案

1. 脑肿瘤干细胞神经球侵袭实验

1. 在T25培养瓶中接种200,000个细胞，加入8 mL完全培养基，于计划进行侵袭实验前1–2周开始培养。
   注意：从接种到进行实验的时间取决于所用BTSC细胞系的增殖速率。
   1. 对于预处理细胞，在神经球准备接种进行侵袭实验前，按预定时间将目标化合物以所需浓度加入培养瓶中。
2. 等待神经球平均大小达到约150–200 μm；通常需要7–14天，具体时间取决于所用BTSC细胞系。
   注意：培养瓶中神经球大小存在分布差异是常见现象。
3. 轻柔倾斜并用移液器混匀培养瓶，将每种处理条件下的500 μL BTSC神经球转移至1.5 mL离心管中，用于接种三个重复孔。
   注意：步骤1.3.1–1.3.2为可选步骤，但建议在新BTSC细胞系首次进行侵袭实验时执行。
   1. 为确定最终进入孔中的神经球密度，请按照步骤1.3准备一个1.5 mL离心管。轻轻混匀神经球后，取100 μL加入另一个96孔板中，静置5分钟，使神经球依靠重力沉降。
   2. 在显微镜下检查神经球数量，确保成像区域包含多个神经球，但不过度拥挤。<....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
大鼠 I 型胶原蛋白	Trevigen	3440-100-01
氢氧化钠	VWR	BDH3247-1
乙酸	Millipore Sigma	AX0073-6
96 孔板	Eppendorf	30730119
T25 Nunc EasYFlask	ThermoFisher	156367
Falcon 15 mL 圆底离心管	ThermoFisher	352096
Incucyte ClearView 96-孔趋化板	Essen Bioscience	4582
IncuCyte Zoom 活细胞实时分析系统	Essen Bioscience	4545
IncuCyte Zoom 活细胞实时分析软件	Essen Bioscience	2016A Rev1
青霉素-链霉素	Sigma	P4333
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma	D8537
胎牛血清（FBS）	Invitrogen	12483-020