小鼠神经周围侵袭模型：构建模拟坐骨神经周围侵袭的体内模型

摘要

来源：Deborde, S. 等. 一种用于研究周围神经侵袭的小鼠坐骨神经体内模型。J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们通过将胰腺癌细胞注射到坐骨神经中，建立了一种用于研究神经周围侵袭的活体小鼠模型。该模型有助于量化侵袭程度，并研究癌细胞与神经之间的相互作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠准备与手术

注意：本研究使用8周龄的雄性和雌性C57BL/6J小鼠。手术操作遵循本机构IACUC的规定。所有器械均经过灭菌，手术操作台面已消毒，动物已消毒，且术者佩戴无菌手套。

1. 手术前一天，使用 2% 异氟烷麻醉小鼠，然后 用剃刀或化学脱毛剂沿股骨背侧纵向去除毛发。
2. 手术当天，使用含2%异氟烷的诱导室对小鼠进行麻醉。通过脚趾夹捏刺激且无反应来确认麻醉效果。
3. 麻醉期间在眼睛上涂抹兽用眼膏以防止干燥。
4. 将麻醉后的小鼠置于俯卧位，用低致敏性胶带轻轻固定每只肢体，使待注射的肢体处于轻度张力状态。 使用精密蒸发器和鼻罩通过异氟烷维持麻醉。
5. 用碘伏清洁注射部位，然后用70%酒精再次清洁。重复此过程两次。确保手术区域无松散毛发残留。
6. 用小剪刀在股骨下方约2 mm处平行于股骨做一长度为1 cm的切口。用镊子将皮肤向外侧牵拉，以暴露下方肌肉。
7. 坐骨神经走行于臀大肌和股二头肌的深面。用小剪刀沿筋膜平面分离这两块肌肉，暴露其下方的坐骨神经。用钝性解剖法将神经从周围肌肉组织中游离出来。
8. 从沉淀物中吸取3 μL癌细胞（约50,000个细胞）至10 μL注射器中。
   注意： 或者，吸取3 μL PBS作为对照。
9. 在注射部位的神经下方放置一把小型金属刮铲以提供支撑。在解剖显微镜下观察，将针头对准金属基底插入神经，插入时尽量使针头与神经保持平行。注意避免刺穿神经背面。在整个操作过程中，应尽可能减少对神经的触碰。
10. 缓慢注射至神经内，持续5秒。注射区域形成膨隆提示注射效果良好。随后将针头留置3秒，再轻柔拔出。针头留置3秒可最大限度减少细胞从神经中回流。
    注意： 注射可朝向远端神经或脊髓进行。在一组实验中必须保持操作一致。如果细胞溢出至目标区域外，则该动物不应纳入实验分析。随着操作经验的积累，此类情况极为罕见。
11. 将神经复位至原始位置，用覆盖的肌肉将神经覆盖。对小鼠给予适当的镇痛处理，然后使用5-0尼龙缝线缝合皮肤。
12. 将小鼠单独置于洁净笼中观察，直至其从麻醉状态完全苏醒。    
    注意： 动物通常需要5–15分钟恢复完全意识。在动物恢复足够意识以维持胸卧位之前，不得使其无人看管。在完全恢复之前，不得将其放回与其他动物同处的环境中。此后，至少每24小时评估一次恢复情况，持续72小时。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小鼠			数量和年龄根据实验需求而定
电动剃毛器	WAHL	9962	可用市售脱毛剂替代
异氟烷，250 mL	Baxter	1001936060
低致敏性外科胶带	3M Blenderm	70200419342
碘伏棉签	PDI	SKU 41350
酒精消毒片（Webcol）	Covidien	5110
无菌外科器械（剪刀和镊子）
10 μL Hamilton 注射器	Hamilton	80308
钢制微型刮匙	Fisher Scientific	S50823
解剖显微镜
布比卡因，1 g	Enzo Life Sciences	BML-NA139-0001	重悬至 0.5%
5-0 尼龙缝线	Ethicon	698H