小脑解剖和切片制备:一种从小鼠小脑生成组织切片的方法

摘要

来源:Thetiot， M. et al.髓鞘器官型小脑切片培养物的制备和免疫染色。J. Vis. Exp. （2019 年）

该视频介绍了一种从小鼠小脑生成组织切片的方法。小脑切片可用于器官型培养，从而深入了解神经发育机制，包括髓鞘形成动力学。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 小脑解剖和切片准备（动手作时间≈每只动物 15-20 分钟）

1. 将含有冰冷解剖培养基的 60 mm 细胞培养皿之一放在双目显微镜下，然后取下顶板。
2. 根据批准的程序，用 70% 乙醇擦拭头部毛发（小心避免接触动物的眼睛），并使用大而锋利的剪刀将动物斩首><。 注意:小脑切片由 P9-P10 小鼠产生，没有任何特定的性别或菌株偏差。
3. 用小剪刀沿着头部中线剪开皮肤，从脖子开始，一直到小鼠口吻。
4. 要握住头部并露出头骨，请将头部下方腹侧的皮肤向后折叠，然后用手指捏住两层皮肤。
5. 将小剪刀轻轻插入枕骨大孔，向侧面做一个横向切口，切开颅骨，然后切开头颅周围的所有部分。剪发时，保持剪刀的尖端尽可能平行并靠近颅骨，以免损坏脑组织。
6. 使用细直的镊子取回颅骨的背侧部分。在小心地提起颅骨的背侧时，如果需要，用小剪刀剪断粘附的脑膜（围绕脑组织的半透明冲洗膜），以避免损坏脑组织。
7. 小心地在腹侧颅骨和大脑之间引入细直的镊子（或使用刮刀），轻轻翻转大脑并用小剪刀剪断视神经和三叉神经。
8. 通过将头部倒置在培养皿上方，帮助大脑在重力作用下落入含有冰冷解剖培养基的 6....

结果

图 1:小脑切片生成的图示。解剖分为三个主要步骤。（A） 分离小脑，去除脑膜（步骤 1.10 和 1.11）。（B） 然后将小脑转移到切碎机平台上并切片（步骤 1.12 至 1.16）。（C） 最后，从蚓部分离切片并放置在膜插入物上。除去与切片一起转移的解剖培养基，并将 6 孔板放入培养箱中（步骤 1.18 和 1.22）。

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材料