脊髓神经元分离:分离新生儿脊髓神经元用于体外研究的密度梯度程序

摘要

[在此处插入FIGURE1]

图 1:3 天龄新生小鼠的脊柱解剖和脊髓释放。（a） 中的箭头指向脊柱的尾端，在那里插入针头以释放脊髓。释放的脊髓 （b） 浸没在 PBS 中。

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图 2:离心后添加细胞的密度梯度。这些图层被勾勒出来，并在卡通描绘上更好地可视化。最浅层 （0） 通常是脊髓组织的碎片。第 1 层富含少突胶质细胞和星形胶质细胞。第 2 层和第 3 层包含大多数神经元。虽然第 3 层包含纯度最高的神经元，但在第 2 层中发现了一些支持细胞（即星形胶质细胞和少突胶质细胞）。底部的沉淀主要含有小胶质细胞。

摘要

来源:Eldeiry， M. et al. 新生小鼠脊髓神经元分离和培养 J. Vis. Exp. （2017）

在本视频中，我们描述了从新生小鼠中分离脊髓神经元以进行体外研究的分步方案。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 采集脊髓

注意:所有仪器都应进行高压灭菌（135 °C 和 30 psi，4 x 7 分钟循环）以保持无菌。

在
1. 含有异氟醚的腔室中对 1-3 日龄的 C57BL/6 小鼠幼崽实施安乐死。停止运动后等待 30 秒并捏住腿以确认没有反应。
2. 用剪刀将头部与身体分开，幼犬处于俯卧姿势。
3. 将后腿或尾巴和手臂稳定在手术台上，背侧面向用户。
4. 用弯曲的虹膜剪刀剪掉皮肤。
5. 从臀部上方的腰部区域切开脊髓，然后切开胸部的两侧，将其与身体分开。
   注意:这需要小心地从内脏器官中解剖脊髓，以避免对其他器官的意外损伤（图 1a）。
6. 在含有 5 mL 0.2 μm 过滤灭菌磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 的 3 x 10 cm 培养皿中依次洗涤 10 秒，以去除多余的组织。
7. 将装有 5 mL 过滤消毒 PBS 的 22G 针头和注射器插入脊柱尾端并颅部冲洗，使脐带流出第四个培养皿（图 1b）。
8. 将脊髓收集在冰上装有 5 mL....

结果

图 1:3 天龄新生小鼠的脊柱解剖和脊髓释放。（a） 中的箭头指向脊柱的尾端，在那里插入针头以释放脊髓。释放的脊髓 （b） 浸没在 PBS 中。

图 2:离心后添加细胞的密度梯度。这些图层被勾勒出来，并在卡通描绘上更好地可视化。最浅层 （0） 通常是脊髓组织的碎片。第 1 层富含少突胶质细胞和星形胶质细胞。第 2 层和第 3 层包含大多数神经元。虽然第 3 层包含纯度最高的神经元，但在第 2 层中发现了一些支持细胞（即.......

材料