建立小鼠心肌梗死模型：小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎手术操作流程 关键词：心肌梗死，小鼠模型，左前降支冠状动脉，永久性结扎，开胸手术，心肌缺血，动物模型，心血管疾病

摘要

来源：Lugrin, J. 等. 采用左前降支冠状动脉永久性结扎的小鼠心肌梗死模型. J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们介绍了一种通过永久性结扎左前降支冠状动脉来建立心肌梗死小鼠模型的手术方法。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 麻醉与气管插管

1. 称量小鼠体重，以确定麻醉药物剂量、术后镇痛药物剂量以及呼吸机的潮气量。将加热垫预热至 37 °C。手术装置示意图见图1。
2. 通过腹腔注射给予小鼠混合麻醉剂，其中氯胺酮剂量为 80 mg/kg，赛拉嗪剂量为 10 mg/kg。
3. 使用电动剃刀快速剃除小鼠喉部及左侧肋骨区域的毛发。
4. 通过夹捏尾巴和/或后肢足部检查麻醉深度，并将动物仰卧位固定在加热垫上。在动物头部下方放置一小块纱布，以避免眼睛过热。涂抹眼用凝胶以防止角膜干燥。
5. 用胶带将四肢固定在加热垫表面。将一段5-0丝线环穿过动物上切牙下方，并将线环末端用胶带粘贴固定在加热垫上。此操作可保持动物口腔张开，便于插管。
6. 在已剃毛区域涂抹脱毛膏，并用棉签轻轻按摩1分钟。用纱布擦去多余的毛发和脱毛膏。使用0.9%生理盐水滴液和纱布清洁切口区域。将无菌纱布块覆盖于已剃毛的喉部和胸壁，并浸润碘伏溶液。
   注意：建议在切口部位使用局部麻醉药物（如利多卡因或布比卡因）。
7. 将呼吸机设置为潮气量 7 mL/kg，通气频率 140 次/分钟。
   注意：从此步骤开始，所有操作均应在显微外科立体显微镜下进行。
8. 牵拉喉部中央皮肤，使用小剪刀沿头尾方向做长约 0.5 cm 的切口。分离唾液腺叶，然后用弯头解剖镊轻轻分离胸骨舌骨肌筋膜，直至暴露喉部和气管。使用连接弹性带的牵开器固定切口边缘。
   注意：此步骤无需切开肌肉。经验丰富的操作者可在不暴露气管的情况下经口插管，因此此步骤可选。
9. 轻柔地将舌头向一侧牵拉。用镊子将16 G套管的钝头内针插入气管。通过喉部切口观察内针是否正确进入气管。
10. 将套管连接至呼吸机，并通过将排气管插入水中来确认通气是否正常。气泡的出现表明插管成功。
    注意：为保持术中组织湿润，可在喉部切口处放置浸有0.9%生理盐水和碘伏的无菌纱布，并在操作过程中控制湿度。

2. 左前降支冠状动脉结扎

1. 松开左侧前肢的胶带，小心将小鼠移至右侧卧位。动物处于正确位置后，固定左侧前肢。
2. 确定左侧胸小肌与胸大肌之间的分界线，沿该线用剪刀做一条长约1 cm的斜行皮肤切口。使用钝头显微剪分离胸肌筋膜，避免切开。用连接弹性带的牵开器保持胸肌分离状态。
3. 将呼吸机设置为呼气末正压（PEEP）3 cm H₂O。
4. 在第3与第4肋骨之间的第3肋间隙处，使用钝头镊子打开胸腔。避免接触胸廓内动脉，以防出血。切勿触碰心脏或肺组织。将两个牵开器插入肋骨间隙，分别置于两侧肋骨下方（图2A）。
5. 使用弯头精细镊子小心去除心包膜，并在不损伤心脏和肺组织的前提下将其拉开。
6. 定位左前降支（LAD）冠状动脉。LAD冠状动脉呈一条浅表的鲜红色细线，从左心耳边缘向心尖方向走行。
7. 使用持针器，在左心房下方2至3 mm处将7-0丝线穿过LAD下方。缓慢拉紧丝线，避免撕裂心肌组织。打三个结固定结扎线。结扎后，左心室的左下部会立即变苍白（图2B–E）。
   注意：操作时切勿过深进入心室腔，也不可过于表浅。对于假手术组动物，将丝线从LAD下方穿过并缓慢抽出，避免组织撕裂。
8. 松开肋骨牵开器，用镊子夹住第3肋骨，并在第3和第4肋骨下方各穿两次6-0丝线。
   注意：切勿穿破心脏或肺组织。暂不收紧结扎线。
9. 在切口处滴加三滴37 °C的0.9%生理盐水溶液，并关闭呼气排气管2至3个呼吸周期，以充分膨胀肺部。随后收紧缝线并打两个结固定。
10. 松开牵拉肌肉的牵开器，协助肌肉复位至正常位置。
11. 使用两针5-0缝合丝线缝合胸壁皮肤，并各打两个结固定。喉部皮肤使用一针5-0缝合丝线缝合，并打两个结固定。

结果

图1： 手术装置示意图。 （A）手术装置包括改装的加热垫、连接至弹性带的呼吸机和牵开器。（B）手术中使用的剪刀、镊子和持针器套装。（C）微型牵开器的特写。未显示：手术体视显微镜。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
30G 针头	BD Microlance 3	304000
钝头拉钩	Fine Science Tools	18200-09
棉签	Applimed SA	6001109
弯头组织剪	Aesculap	BC603R
电动剃须刀	Remington	HC720
脱毛膏，Veet	Silk & Fresh Tech.	8218535
微型剪刀，弯头钝/钝	Aesculap	FM013R
1 mL 注射器，Omnifix-F	B. Braun	9161406V
5-0 丝线缝合线，BB	Ethicon	K880H
6-0 丝线缝合线，P-1	Ethicon	639H
7-0 丝线缝合线，BV-1	Ethicon	K804
学生型 Dumont #7 镊子	Fine Science Tools	91197-00
学生型精细镊子，弯头	Fine Science Tools	91110-10
外科手套	Weitacare	834301
手术加热垫	个性化设置
镇痛新溶液 0.3 mg/mL 布托啡诺	Indivior Schweiz AG	N02AE01
16G 静脉导管内针（用于气管插管）	Abbocath-T	G714-A01
Universal S3 显微镜，OMPIMD	Zeizz
呼吸机，MiniVent 型号 845	Harvard Apparatus	73-0043
Viscotears	Alcon	1551535
70% 乙醇
聚维酮碘 60 mL	MundiPharma