朗根多夫逆行心脏灌注：一种离体灌注小鼠离体心脏的技术

摘要

来源：Wu, K. 等。改良Langendorff法同步分离成年小鼠心房与心室心肌细胞。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们对离体小鼠心脏进行朗根多夫逆向灌流。在操作过程中，将导管插入升主动脉，通过冠状动脉逆向灌注灌流液，以维持心脏的生理活动。该模型用于研究心脏的病理生理学机制。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 溶液与灌流装置的准备

1. 组装一个恒流Langendorff装置（可购买商用产品或自行制作）。图1提供了一个简单的示意图。
2. 根据表1和表2中列出的试剂配制所需溶液。
3. 打开循环水浴锅，并调节合适的输入温度（本实验室为42.7 °C），以确保灌流液经插管流出时达到37 °C。
4. 使用去离子水循环清洗灌流系统。若需要无菌条件，则先用75%乙醇在灌流系统中运行15分钟，随后用去离子水冲洗（至少10个循环，以避免乙醇对心脏产生毒性影响）。
5. 测量灌流液循环系统一个循环所需的时间和体积，以确定下一步灌流时应加载多少毫升的含氧Tyrode溶液。
6. 采用适当方法对所有手术器械进行灭菌处理。
7. 将灌流液系统的流速设定为4 mL/min。
8. 准备两个洁净的35 mm培养皿——一个盛有Tyrode溶液（培养皿1），另一个盛有溶液1（培养皿2）。
9. 准备一支装有溶液1的1 mL注射器，以及一根带有切口的20 G钝头不锈钢插管针（切口距针尖1 mm）。在插管杆上用3-0缝合线打一个松结。调节体视显微镜的观察视....

结果

图1. 组装好的改良Langendorff系统的示意图。 该系统对用户而言经济且便携。系统包含两段塑料管——一段用于水（内径8 mm），另一段用于灌流液（内径1.5 mm）——其远端连接至带有鲁尔锁的PE医用三通旋塞。一个装有水并配有橡胶塞的玻璃瓶作为热交换器。灌流液由蠕动泵泵入热交换器中的塑料管，然后从连接套管的三通旋塞流出。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2,3-丁二酮单肟（BDM） 	Sigma-Aldrich 	31550
CaCl<sub>2</sub>&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	C4901
葡萄糖&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	G7528
HEPES&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	H3375
KCl&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	P9333
KH<sub>2</sub>PO<sub>4&nbsp;</sub>	Sigma-Aldrich&nbsp;	P5655
KHCO<sub>3</sub>&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	237205
MgCl<sub>2</sub>&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	M8266
MgSO<sub>4</sub>&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	M7506
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>	Sigma-Aldrich&nbsp;	S7907
NaCl&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	S7653
NaHCO<sub>3</sub>&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	S5761
蠕动泵&nbsp;	Longerpump&nbsp;	BT100-2J
牛磺酸&nbsp;	Sigma-Aldrich&nbsp;	T0625
水浴锅&nbsp;	JULABO&nbsp;	ED (v.2)