急性胆源性胰腺炎模型：通过胰管灌注建立小鼠急性胆源性胰腺炎模型的方法

摘要

来源：Serra, M. B. 等. 牛磺胆酸钠诱导C57BL/6小鼠重症急性胰腺炎. J. Vis. Exp. (2021)

本视频介绍了通过胰腺输注牛磺胆酸钠建立急性胆源性胰腺炎小鼠模型的操作步骤。该模型有助于研究牛磺胆酸钠在胰腺中诱导的病理生理学变化。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 开腹手术

1. 使用赛拉嗪（10 mg/kg）和氯胺酮溶液（80 mg/kg）进行皮下麻醉（0.1 mL/10g 体重），采用1 mL注射器和26 G ½（13 x 0.45 mm）针头。通过夹捏脚趾检查麻醉深度是否足够。使用加热垫控制体温。确保所有手术器械均为无菌状态。
2. 用5%聚维酮碘溶液清洁腹部区域，并使用剃毛器去除胸部至下腹部之间的毛发（约2 cm²）。再用70%酒精清洁手术区域。
3. 使用手术胶带将动物固定在手术板上。用剪刀在腹部上部、剑突下方1 cm处横向剪开皮肤约5 mm。在腹膜上重复相同切口。此操作将实现腹腔的小切口暴露。

2. 定位并暴露胰腺

1. 借助拉钩，将肝脏向小鼠头部方向牵拉，使其距离肠道约 1 cm。
2. 确定将注射牛磺胆酸钠的胰腺区域（胰头）。以肝脏为参照定位十二指肠——位于肝脏下方右侧（当观察小鼠时为左侧）。十二指肠是小肠的起始部分，与胃的末端相连。
3. 借助镊子，将肝脏向动物头部方向提起，并轻轻牵拉小肠段。用 6-0 聚丙烯缝线固定小肠两侧端，以便更好地观察胆总管远端部分。

3. 重症急性胰腺炎的诱导

1. 用微血管夹暂时阻断近端胆总管，以防止逆向灌注液渗漏至肝脏。胆总管位于十二指肠的肝脏侧，其与十二指肠连接处呈白色。将器官暴露于腹腔外。
2. 用连接直径0.54 mm聚乙烯导管的0.4 mm针头穿刺壶腹周围区域（小肠壁的灰白色部分），进入胆总管。
3. 用8-0缝线暂时阻断远端胆总管，防止牛磺胆酸钠溶液渗入十二指肠。
4. 启动输液泵，以10 µL/10 g体重的恒定速度，持续3分钟灌注2.5%牛磺胆酸钠溶液（用0.9%生理盐水稀释）。
5. 灌注结束后，移除微血管夹、临时8-0缝线以及胆胰管内的注射针头，以恢复胆汁的生理流动。
6. 最后，用6-0非吸收性单丝聚丙烯缝线缝合腹腔。从开腹至缝合结束的时间应不超过30分钟（见图1）。
7. 术后将动物饲养于铺有木屑的聚乙烯盒中，并自由供应水和食物ad libitum。
8. 对照组小鼠的处理方式与实验组小鼠相同，但确保灌注液仅为生理盐水。在对照组（假手术组，SHAM）中执行相同的手术操作和生理盐水灌注（10 mL/min，持续3分钟），以消除手术和插管引起的炎症偏倚。
9. 术后恢复后开始，每8小时皮下注射曲马多12.5 mg/kg。

结果

图1： 通过2.5%牛磺胆酸钠在C57BL/6小鼠中诱导重症急性胰腺炎的示意图。 (A) 胆囊； (B) 胆总管； (C) 胰管； (D) 门静脉； (E) 微血管夹； (F) 穿刺部位（针头连接聚乙烯导管并连接至输液泵）； (G) 胆总管中针头的临时固定。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.4 mm 针头	INTRAG MEDICAL TECH	90183210	30G
0.54 mm 聚乙烯管	Tygon	730010
泡沫塑料块
用于固定小鼠的遮蔽胶带	Missner	1236
输注泵设定为 10µL/min	Havard aparatus-Peristaltic Pump Series	MA1 55-7766	 Model 66 Small Peristaltic
剪刀和镊子
抗菌聚维酮碘	Pfizer	12086OR	抗菌处理
70% 乙醇	SIGMA	459836	将 700 mL 100% 乙醇与 300 mL dH₂O 混合
剃毛刀片	Lord	bdk9a1ghk6	用于剃毛
牛磺胆酸钠	Sigma-Aldrich	86339- 1G	CAS 号- 345909-26-4
微血管夹	Medicon Surgical	56.87.35	吻合器，开口 4.0 mm，闭合压力 30–40 g
6-0 Prolene	Bioline	5162	缝合线
Ketamin NP（右旋氯胺酮盐酸盐）50 mg/mL	Cristália
2% 赛拉嗪	Syntec
无菌生理盐水（0.9% (w/v) 盐水）	Farmace	105851
甲基蓝	Sigma-Aldrich Chemicals	M5528
Desmarres 拉钩（13 mm 宽）	ROBOZ	RS-6672