小鼠横位主动脉弓缩窄术：一种诱导左心室高压的微创小鼠模型技术

摘要

来源：Zaw, A. M. 等. 小鼠微创横主动脉缩窄术. J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，我们演示了一种在小鼠中进行微创横向主动脉缩窄的实验方案，用于研究压力超负荷诱导的心力衰竭。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术部位准备

1. 用75%异丙醇对操作部位进行消毒。将加热垫温度调节至37 °C，以避免实验动物心率和呼吸频率发生变化。
2. 使用在121 °C下通过重力置换灭菌器灭菌30分钟或采用其他适当方法灭菌的手术器械。
3. 取2–4根30号针头，用持针器将其弯曲，如图1所示，制成用于结扎和组织分离的工具，并可作为牵开器使用。将弯曲后的针头固定在棉签上，供手术中使用。
4. 将一根27号针头钝化，并用持针器将其弯曲90º。通过在硬质表面摩擦使针尖变光滑，以在结扎步骤中作为0.4 mm的间隔物使用。

2. 动物准备

1. 根据体重，使用适量的氯胺酮和赛拉嗪混合物（100 mg/kg + 10 mg/kg，腹腔注射）对一只2月龄、雄性、体重22–25 g的C57BL/6N小鼠进行麻醉。通过无尾夹反射确认麻醉效果。
2. 将脱毛膏涂抹于小鼠颈前部和胸部，持续2至3分钟以去除毛发。随后用温水和棉签擦除脱毛膏。
3. 在动物眼睛上涂抹眼用软膏或凝胶，以防止角膜干燥。
4. 将动物仰卧位放置于加热垫上，并进行术中监测，确保每15分钟记录一次相关数据。
5. 使用外科纸胶带将动物四肢固定在加热垫上，以确保手术过程中动物保持正确体位。
6. 交替使用酒精和聚维酮碘溶液对皮肤进行三次消毒。
7. 使用带有暴露手术区域的无菌洞巾以防止污染。每只小鼠均需使用新的无菌手套，并根据需要及时更换。

3. 连接反应步骤

1. 用手术刀在小鼠颈部和胸部的中线位置切开皮肤。
2. 用钝头剪刀轻轻分离结缔组织，将甲状腺向头部方向牵拉。
3. 用弯头针从中线处将气管上的肌肉层向两侧分离。
4. 使用钝头剪刀将胸骨剪至第二肋（约5 mm），用牵开器或弯头镊子撑开切口。
5. 用弯头针分离胸腺叶之间的以及胸腺与下部胸壁之间的结缔组织；此时横行的主动脉弓和两条颈动脉将清晰可见。
6. 将弯头针置于主动脉弓下方，推动针头从对侧穿出，穿透血管壁与结缔组织之间的间隙。
7. 用弯头针将6-0单丝缝线从主动脉弓下方穿过。
8. 将间隔物放入缝线环中，用双结固定缝线，然后轻柔地移除间隔物。
9. 通过观察结扎位置确认缩窄成功，剪去缝线线头。
10. 使用6/0丝线以间断缝合法关闭胸壁，再用6/0单丝缝线以连续缝合法关闭皮肤。

4. 术后护理

1. 将聚维酮碘溶液涂抹于缝合部位，并将动物置于预热的笼子中进行恢复和术后监测。
2. 动物恢复意识后，注射布托啡诺（0.05–0.1 mg/kg，皮下，每12小时一次），以缓解疼痛，并为小鼠提供适宜的软质食物。
3. 待动物完全恢复后，将其送回12小时光照/12小时黑暗循环的房间。

结果

图1：通过弯曲1英寸、30号针头尖端形成所需钩状结构的过程。 (A) 原始的1英寸、30号针头尖端。 (B) 用持针器夹住针头尖端，并在其长度约一半处进行弯曲。根据需要使用持针器和手将针弯曲成环状，形成如图右上方所示的环形结构。 (C) 用聚氨酯管套住针头，以固定弯曲部分的位置。 (D) 使用持针器将环状结构的尖端弯曲成所需形状。本示例中展示了一种具有两个45–60°弯折的针头尖端，仅用于说明目的。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1 英寸 30 号针头	BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA	305128	按操作步骤及图 1 所示弯曲
27 号针头	BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA	301629	磨钝并抛光作为间隔物
6/0 Dafilon	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany	C0933066
6/0 Silkam	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany	C0762067
无菌手套	A.R. Medicom, Inc (Asia), Hong Kong
棉签	Mannings, Quarry Bay, Hong Kong		本地购物中心
脱毛膏	Veet (Hong Kong), Kwun Tong, Kowloon, Hong Kong		本地购物中心
Lexer-Baby 眼科剪	FST, British Columbia V7H 0A6, Canada	14078-10
弯头虹膜镊	FST, British Columbia V7H 0A6, Canada	11065-07
微型 Olsen-Hegar 持针器	WPI, Sarasota, FL 34240, USA	501989
体视显微镜	WPI, Sarasota, FL 34240, USA	PZMIII-BS
GenTeal 眼用凝胶	Novartis, East Hanover, NJ 07936, USA		本地药店
加热垫	Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790, USA	DCT-20
手术胶带	Laboratory Animal Unit
氯胺酮和赛拉嗪	Laboratory Animal Unit
聚维酮碘	Laboratory Animal Unit
丁丙诺啡	Laboratory Animal Unit