小鼠胚胎的获取：从怀孕小鼠中采集胚胎的操作流程

摘要

来源：Yun, K. 通过亚甲蓝染料注射评估尿路连接处梗阻缺陷。 J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了从怀孕小鼠中取出胚胎的操作过程。所获得的围产期胚胎可作为研究哺乳动物发育的模型系统。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 胚胎产前解剖

1. 用70%乙醇清洁解剖剪和镊子。
2. 为在E18.5或E19.5收集围产期胚胎，首先通过吸入CO₂ 对怀孕小鼠实施安乐死，随后根据伦理指南进行颈椎脱位。
   注意：怀孕雌性小鼠通常从E18.5开始分娩，但较大的肾脏更易于操作。因此，接近出生时间的E19.5肾脏更便于进行此项分析。然而，双侧尿路梗阻的仔鼠在出生后会死亡。应根据实验小鼠的具体特征，通过实验经验确定合适的采集时间点。
3. 用70%乙醇喷洒腹部腹侧表面，然后使用解剖剪和镊子沿腹侧打开腹腔。
4. 提起整个子宫，并用解剖剪在子宫角末端处剪断，将其与身体分离。
5. 在培养皿中用1×PBS冲洗整个子宫。
6. 用解剖剪将子宫分段剪开，并用解剖镊去除胎盘蜕膜，以暴露卵黄囊中的胚胎。
7. 先去除卵黄囊，再用解剖镊去除羊膜，以释放围产期胚胎。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
精细手术剪	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6702
显微解剖镊	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5135
Dumont镊子；5号型	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5045
Quality Biological Inc. 生理盐水 - 500 mL	Fisherscientific	50-983-204