小鼠胚胎泌尿道亚甲蓝染料注射：一种评估泌尿道先天性梗阻的方法

摘要

来源：Yun, K. 通过亚甲蓝染料注射评估尿路连接处梗阻缺陷。 J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，我们向围产期胚胎小鼠的泌尿系统注射亚甲蓝染料，以评估与泌尿系统梗阻相关的先天性异常。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核

1. 亚甲蓝染料溶液的制备

1. 称取0.1 g亚甲蓝粉末。
2. 将亚甲蓝加入10 mL生理盐水或1×磷酸盐缓冲液（PBS）中，通过涡旋充分溶解。
3. 使用注射器滤器（膜孔径0.45 µm）过滤10 mg/mL的亚甲蓝溶液，以防止注射时发生堵塞。
4. 将无菌头皮静脉输液套件（27 G × 3/4″）与一支3 mL一次性注射器组装，并用3 mL过滤后的亚甲蓝溶液充满注射器。
   注意：为防止静水压力导致染料自行流出，应将针尖置于盛有亚甲蓝溶液的注射器上方。

2. 产前胚胎的解剖

1. 用70%乙醇清洁解剖剪和镊子。
2. 为在E18.5或E19.5收集围产期胚胎，首先使用CO₂吸入法对怀孕小鼠实施安乐死，然后根据NIH指南进行颈椎脱位。
   注意：怀孕雌性小鼠通常从E18.5开始分娩，但较大的肾脏更易于操作。因此，接近出生时间的E19.5肾脏更便于进行本项分析。然而，双侧尿路梗阻的仔鼠在出生后会死亡。应根据实验小鼠的具体特征，通过实验经验确定合适的采....

结果

图1. 亚甲蓝染料注入正常泌尿系统的示例。（A） 围产期胚胎（E19.5）去除多余组织后泌尿系统的典型图像。可见两个肾脏、两条输尿管和一个膀胱，并伴有生殖器官，此处为睾丸 （B） 向正常肾脏注入染料的示例。可见向肾脏肾盂注射的位点（黑色箭头）。让染料流动5秒后，输尿管和膀胱腔内可见浅色染料。 （C） 向两个正常肾脏注射染料后膀胱腔内的染料积聚。让染料流动20秒后，由于染料溶液在膀胱腔内积聚，颜色明显加深。肾脏中亦可见肾盂呈现浅色染料。B：膀胱，K：肾脏，T：睾丸，U：输尿管。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
亚甲蓝	Sigma-Aldrich	M9140
Quality Biological Inc. 生理盐水 - 500 mL	Fisherscientific	50-983-204
带 BD Luer-Lok 接头的 3 mL 一次性注射器	BD	309657
带 Supor 膜的 Acrodisc 注射器滤器	Pall corporation	4614
Exel 头皮静脉（蝴蝶型）穿刺针；27G x 3/4" 12"	EXELINT	26709
精细手术剪	Roboz 外科器械公司	RS-6702
显微解剖镊	Roboz 外科器械公司	RS-5135
Dumont 镊子；型号 #5	Roboz 外科器械公司	RS-5045
BD PrecisionGlide 针头 30G x 1/2"	BD	305106