新生小鼠卵巢分离：从新生小鼠模型中获取一对卵巢的手术操作

摘要

来源：et al. Morgan, S. 小鼠卵巢及卵巢卵泡的培养与共培养。J. Vis. Exp. (2015)。

在本视频中，我们介绍了一种从新生小鼠分离卵巢的手术操作方法。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。 

1. 新生小鼠卵巢解剖与培养

1. 将1 mL解剖液（在Leibowitz L15培养基中溶解3 mg/mL BSA，并通过0.2 µm孔径、25 mm直径的滤器过滤除菌）加入每个无菌玻璃胚胎培养皿中。
2. 处死出生后0至5天的新生小鼠幼崽，采用断头法处死。
3. 使用精细解剖镊夹住覆盖腹壁的皮肤，对皮肤和体壁进行大切口。拉开切口，使整个腹部暴露。此阶段膀胱通常充盈，可刺破以方便解剖操作。
4. 使用钟表匠镊子将肠道移开。沿两侧膀胱向上追踪子宫角至肾脏。卵巢位于肾脏下方、子宫顶端，在解剖显微镜下呈云雾状结构。
5. 用钟表匠镊子轻轻夹住卵巢，使用剪刀切断其与子宫的连接。将一对卵巢转移至含有预热解剖液的胚胎培养皿中。
6. 在加热载台（37 °C）上的解剖显微镜下对卵巢进行精细解剖。使用胰岛素注射针头修剪去除卵巢鞘膜及包括输卵管在内的多余组织，直至仅剩卵巢组织。
7. 使用精细拉制的弯头玻璃移液管将每个卵巢转移至培养板的孔中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Leibowitz L15	Invitrogen	11415049
αMEM	Invitrogen	22571020	以碳酸氢钠缓冲液形式提供（2,200 mg/L）
牛血清白蛋白	Sigma Aldrich	A9418	用于解剖培养基
牛血清白蛋白	Sigma Aldrich	A3311	用于培养培养基
牛血清白蛋白	Sigma Aldrich	A2153	用于包被玻璃移液管
FSH	Merck Serono	Gonal F	通常需要进行批次测试。用 αMEM 配制 1 IU/10µL 的储存液，于 -20 °C 保存
注射器滤器（25 mm，0.2 µm）	Greiner	16532K	醋酸纤维素滤膜，用于过滤较大体积（>5 mL）的培养基
无菌离心管	Greiner	187261
24孔板	Greiner	662160
胰岛素注射针头	BD 医疗用品	037-7606	0.33 mm（29 G）+ 1 mL
玻璃胚胎培养皿	VWR	720-0579	使用前需灭菌并预热
玻璃移液管	Fisher Scientific	10209381	使用前需用 BSA 包被
针灸针	Acumedic LTD	30 mm x 0.25 Type C
中性缓冲福尔马林溶液，10%	Sigma Aldrich	HT5014-120mL
Whatman 核孔膜	Camlab	WN/110414	使用时亮面朝上，聚碳酸酯材质，直径 13 mm，孔径 8.0 µm