胆道系统树脂铸型：利用不透射线树脂注射分析小鼠模型胆道系统三维结构的技术 关键词：胆道系统，树脂铸型，三维结构，小鼠模型，不透射线树脂，放射成像

摘要

来源：Hankeova, S. 等. DUCT：双重树脂铸型结合显微计算机断层扫描用于肝脏三维分析. J. Vis. Exp. (2021)

本视频介绍了胆道系统树脂铸型的操作流程，以帮助理解胆道系统的三维结构。该技术可提供胆道系统内径大小及网络连接情况的信息，可用于肝脏再生分析。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。

1. 双重树脂注射

1. 准备
   1. 准备树脂溶液。对于双系统树脂注射，按照步骤 1.1.2–1.1.4 所述方法分别准备黄色和绿色树脂。
   2. 每只小鼠准备 1 mL 稀释后的树脂分装液。
   3. 黄色树脂：将黄色硅橡胶（高放射不透性）与透明稀释剂按 3:1 比例稀释，以制备用于注射的黄色树脂。
   4. 绿色树脂：将蓝色硅橡胶（无可检测的放射不透性）与透明稀释剂按 1:1 比例混合，制备蓝色树脂。为生成绿色树脂，将稀释后的蓝色树脂与稀释后的黄色树脂按 1:1 比例混合。充分涡旋震荡绿色树脂，直至颜色均匀。
      注意： 蓝色树脂的放射不透性极低，在微计算机断层扫描（microCT）中无法检测，因此必须与黄色树脂混合，以制备出具有不同放射不透性的两种树脂。
      警告： 树脂可能含有铬酸铅，属于致癌物，在火灾中会产生有毒气体。请小心操作，并将树脂作为危险废物处理。
   5. 按照步骤 1.1.6–1.1.11 所述方法，准备两套注射装置（注射装置 #1 和注射装置 #2），并连接导管。
      注意： 对于....

结果

图1：树脂铸型用注射装置。（A）注射装置#1由一支30 G针头和长约30 cm的PE10导管组成。注射装置#2由一支23 G针头和长约30 cm的PE50导管组成。（B）导管末端被拉伸并斜向剪切，以形成斜面尖端。A和B中的尺子为厘米尺，主刻度间隔为1 cm，中间刻度间隔为5 mm，次级刻度间隔为1 mm。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1.5 mL 安全密封微量离心管  	Sarstedt	72.706
带导管的 23 G 蝴蝶针 	BD bioscience	367283
23 G 针头  	BD bioscience	305892
30 G 针头	 BD bioscience	305106
琼脂糖  	Top-Bio	P045
苯甲醇	Sigma Aldrich	108006
苯甲酸苄酯 	 Sigma Aldrich	B6630
Corning 50 mL 离心管  	Sigma Aldrich	CLS430829-500EA	 聚丙烯
棉签 	Medicarier 	60406
解剖显微镜  	Leica Camera AG	Leica M60
杜尔贝科磷酸盐缓冲液  	ThermoFisher Scientific	14190144
70% 乙醇  	VWR	83801.41
Falcon 15 mL 管 	Verkon	 331.850.084.006
弯头镊子 	Fine Science Tools	 11051-10	 精细 Graefe 10 cm 弯头
直头镊子 	Fine Science Tools	 11050-10	精细 Graefe 10 cm 直头
甲醛溶液 	 Sigma Aldrich	F8775
汉克斯平衡盐溶液 	ThermoFisher Scientific	14025092
肝素	 Leo Pharma 	B01AB01	 5000 IE/mL
异氟烷 	Baxter 	FDG9623
甲醇  	ThermoFisher Scientific	11413413
MICROFIL   	Flowtech	MV-122	黄色合成树脂
MICROFIL  	Flowtech	MV-120 	蓝色合成树脂
MICROFIL 	Flowtech	MV-diluent	 透明树脂稀释剂
巴斯德移液管 	Verkon 	130.690.424.503
蠕动泵  	AgnThos	010.6131.M20
摇床 	VWR 	444-0142
丝线缝合线  	AgnThos	14757	黑色丝线，4-0，无菌，100 m
皮肤剪刀  	 Fine Science Tools	14058-09	直头虹膜剪，9 cm
弹簧剪刀   	Fine Science Tools	15000-03	Vannas 微型剪，直头，2 mm
1 mL 鲁尔注射器 	 BD bioscience	303172
PE10 导管 	BD bioscience	427401
PE50 导管 	BD bioscience 	427411