小鼠模型中光血栓性卒中的建模：通过小鼠颅骨进行激光照射的技术，在给予光敏染料后诱导光血栓形成

摘要

来源：Llovera, G. 等。小鼠卒中模型：通过光血栓法诱导局灶性皮层损伤。J. Vis. Exp. (2021)

本视频演示了通过在给予光敏染料后，对完整颅骨进行激光照射，在小鼠模型中诱导光栓塞性卒中的操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物准备

1. 术前30分钟注射镇痛剂（卡洛芬4 mg/kg，丁丙诺啡0.1 mg/kg）。
2. 记录小鼠体重，以调整玫瑰红染料的注射剂量（10 µL/g，即100 µg/g）。
3. 将小鼠放入诱导室，以4%异氟烷流速麻醉，直至其身体和触须的自发运动停止。
4. 将小鼠转移至立体定位仪，使其呈俯卧位，鼻部插入麻醉面罩。固定动物后，维持异氟烷浓度为4%，持续1分钟，随后降低并维持在2%。
5. 轻柔插入直肠探头，以在手术过程中持续监测体温。设置相应的反馈控制加热垫，维持小鼠体温在37 °C。
6. 在双眼涂抹泛醇眼膏，并用消毒剂清洁皮肤及周围毛发。

2. 光化学血栓模型

1. 做一个2.0–2.5 cm的纵向切口并牵开以暴露颅骨。通过单一切口完成颅骨暴露，以避免伤口并发症。
2. 用棉签轻轻去除骨膜，并辨认冠状缝。
3. 戴上护目镜，打开561 nm激光器，标记bregma左侧+3 mm处。
4. 关闭激光器，在上述提到的标记坐标处贴上一个直径为4 mm的带孔贴纸。
5. 向小鼠腹腔注射 Bengal Rose（10 µL/g）。将激光束置于距颅骨 4–5 cm 处，开启 561 nm 激光器，照射颅骨 20 分钟。
6. 滴加两滴0.9%生理盐水于 将颅骨置于湿润环境中以恢复水分，缝合伤口，并将动物放入37 °C的恢复室中，使其从麻醉状态中恢复。1小时后，将小鼠送回温度可控房间内的笼子中。
7. 术后3天内每12小时注射一次镇痛剂（4 mg/kg 卡洛芬和 0.1 mg/kg 布托啡诺）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
561 nm 波长激光器	Solna	Cobolt HS-03
C57Bl/6J 小鼠	Charles River	664
准直器	Thorlabs	F240APC-A
棉球	NOBA Verbondmitel Danz	974116
70% 乙醇	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
精细剪刀	FST	15000-00
镊子	FST	11616-15
加热垫	FHC DC Temperature Controller	40-90-8D
异氟烷	Abbot	B506
防护眼镜	Laser 2000	NIR-ZS2-38
玫瑰红染料	Sigma Aldrich	198250-5G
生理盐水溶液	Braun	131321
立体定位仪	Stoelting	51500U
异氟烷麻醉系统	Drager
磷酸盐缓冲液 pH: 7.4	Apotheke Innestadt Uni Munchen	P32799