小鼠胰岛移植模型：经门静脉输注胰岛的手术方法及术后出血的预防

摘要

来源：Gou, W. 等. 在小鼠肝内胰岛移植过程中减少输注后门静脉出血的方法。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们介绍了一种将胰岛细胞输注至肝门静脉，随后应用明胶海绵以成功防止出血的操作步骤。术后出血是胰岛移植过程中导致高死亡率的常见原因。

方案

1. 胰岛移植

1. 使用 2% 异氟烷诱导并维持小鼠全身麻醉。通过检查足底反射是否消失，以确保动物已充分麻醉。
2. 剃除小鼠腹部区域的毛发。
3. 术前单次给予布托啡诺（0.1 mg/kg，腹腔注射）。
4. 用 2% 碘液和 75% 酒精交替擦拭三次，对手术区域进行消毒。
5. 使用显微剪刀行剖腹手术，制作 1–1.5 cm 的切口。
6. 用牵开器打开腹腔。随后根据下述方法 A 或方法 B 进行操作。

方法 A：（使用明胶海绵止血，图 1A）

1. 小鼠准备
   1. 在切口周围放置无菌纱布。
   2. 用镊子轻轻拉出肠管，并将其置于纱布上。
   3. 根据位置识别门静脉，并充分暴露。
   4. 在整个手术过程中，用温热的生理盐水浸湿的纱布覆盖肠管。
2. 将预装胰岛的胰岛素注射器针头穿过靠近十二指肠的门静脉（图1B）。操作时，持针使针孔（斜面）朝下，并在穿刺血管壁前，使针孔开口面的角度与门静脉壁平行。
   1. 回抽活塞，吸取少量血液（20–50 μL）进入注射器，以首先混匀胰岛。
   2. 在反复回抽和推进活塞的同时，缓慢将胰岛注入门静脉。
   3. 取一块明胶海绵（大小约为 0.5 cm × 0.5 cm）覆盖注射部位。
   4. 拔出门静脉内的针头时，用棉签尖端压紧明胶海绵。
   5. 持续压迫明胶海绵约 2 分钟，确认无活动性出血。
   6. 将棉签尖端滚动并移离明胶海绵，确保明胶海绵良好覆盖门静脉。

方法B：（用脂肪垫止血，图1C）

1. 充分暴露门静脉。
   1. 使用两个棉签从左侧和右侧夹住暴露的门静脉。
   2. 辨认十二指肠与门静脉之间的脂肪组织垫。
   3. 在将针头插入门静脉之前，先穿透该脂肪垫（图1D）。
   4. 按照上述方法A中描述的类似步骤输注胰岛。
   5. 拔出针头时，用棉签按压脂肪组织。
   6. 拔针后继续按压脂肪垫1分钟。
2. 确认门静脉无出血后，轻柔地将肠道复位至腹腔内的原始位置。
3. 关闭前在腹腔内留置0.5 mL温生理盐水（36–37 °C）。
   注意：温生理盐水有助于术后肠道蠕动和恢复，并防止肠道坏死。
4. 用5-0缝线缝合肌肉层。
5. 用4-0缝线缝合皮肤层。
6. 将小鼠置于铺有加热垫的清洁笼中，直至其完全从麻醉中恢复。
7. 术后48小时内每12小时给予一次镇痛剂（例如，腹腔注射布托啡诺 0.1 mg/kg）并提供辅助加热。
   ​注意： 胰岛移植手术完成大约需要15–20分钟。

结果

图 1：肝内胰岛移植操作示意图。（A，C）方法 A 和方法 B 中使用的关键步骤示意图。（B，D）胰岛通过门静脉直接注射（C）或通过脂肪垫间接注射（D）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10% 中性缓冲福尔马林 v/v	 Fisher Scientific	 23426796
1 mL 带针注射器	 AHS	 AH01T
20 mL 注射器	 BD	 301031
25G × 5/8" 皮下注射针头	 BD	 305122
无菌酒精消毒片	 Fisher Scientific	 22-363-750
动物麻醉系统	 VetEquip, Inc.	 Inc. 901806
盐酸丁丙诺啡注射液	 Par Sterile Products LLC	 NDC 42023-179-05
无水乙醇（200 proof），分子生物学级	 Fisher Scientific	 BP2818500
超细显微解剖剪，4” 直头尖锐型	 Roboz Surgical Instrument Co.	 RS-5882
明胶海绵（USP 可吸收明胶海绵）	 Pharmacia & Upjohn Company	 34201
Graefe 镊子，4” 超精细尖端	 Roboz Surgical Instrument Co.	 RS-5136
加热垫	 Amazon	 B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner 持针器，5.25”	 Roboz Surgical Instrument Co.	 RS-7850
带 27 号针头的胰岛素注射器	 BD	 879588
碘伏消毒片	 Fisher Scientific	 19-027048
异氟烷	 Piramal Critical Care	 NDC 66794-017-25
聚丙烯缝线 4-0	 Med-Vet International	 MV-8683
聚丙烯缝线 5-0	 Med-Vet International	 MV-8661
氯化钠 0.9% 静脉注射液	 VWR	 2B1322Q
无菌手术巾	 Med-Vet International	 DR1826