从小鼠中完整采集卵巢：一种从小鼠模型中分离完整卵巢的手术方法

摘要

来源：Mason, J. B. 等. 研究卵巢衰老对雌性小鼠寿命和健康寿命影响的原位卵巢移植操作程序. J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们介绍了一种从小鼠模型中获取完整卵巢的手术操作方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 将完整卵巢移植到老年小鼠

注意：本方案描述了将年轻小鼠（60日龄）的卵巢移植到同品系的生殖后期雌性小鼠（12月龄）体内的操作步骤。该操作步骤同样适用于任意两只雌性小鼠之间的卵巢移植。

1. 称重并经腹腔注射（I.P.，27号针头）麻醉供体动物，例如使用氯胺酮、赛拉嗪和乙酰丙嗪混合物（氯胺酮65 mg/kg，赛拉嗪13 mg/kg，乙酰丙嗪2.0 mg/kg；混合剂量为6.5 ml/kg）。将动物放回加热的饲养笼中，直至麻醉生效。
2. 麻醉后，将动物从饲养笼中取出，置于加热的纸巾上。使用电动剪毛器（推荐#40刀头），从肋骨下方开始向远端方向，在身体两侧中线旁数毫米处剪除毛发，制备出左右两侧各约2–3 cm见方的无毛区域，保留中线处一条约1–2 cm宽的毛发带。
3. 用70%乙醇轻轻擦拭剪毛区域，并用棉签涂抹聚维酮碘溶液于剪毛部位。
4. 为保护眼睛涂抹抗生素眼用凝胶，并在动物颈部侧面皮下注射（S.C.，27号针头）美洛昔康（2.0 mg/kg）以缓解术后疼痛。
5. 将动物俯卧位放置于加热的无菌手术区域，用浸有70%乙醇的2 cm × 2 cm棉纱布擦拭剪毛区域。
6. 在腰部区域做一1.0–1.5 cm长的切口，钝性分离皮肤与下方筋膜。再切开筋膜，然后尽可能表浅地在筋膜下方向外侧钝性分离，直至进入腹腔。
7. 在切口上覆盖一小块手术敷料（由2 cm × 2 cm纱布裁剪而成），并用无菌生理盐水润湿敷料。
8. 使用小型镊子在腹腔内找到包裹卵巢的脂肪组织，轻柔地取出脂肪垫和卵巢，并将其置于湿润的纱布敷料上。卵巢脂肪垫的颜色较周围脂肪组织更“白”。
9. 在脂肪垫上夹一个1.5英寸的血管夹（注意不要压迫卵巢囊），以固定组织通路，便于操作。
10. 调整解剖显微镜到位，清晰辨认卵巢囊。用两把钟表镊夹住卵巢囊，在卵巢门对侧切开卵巢囊以暴露卵巢。若拟切开部位血管丰富，可用注射器滴加肾上腺素（1:100,000）至囊表面，以减少撕裂时出血。
11. 轻柔地将卵巢从卵巢囊中分离取出，并用钟表镊夹闭卵巢门部位，以防止出血，随后将卵巢切除。
12. 将供体卵巢置于盛有4°C无菌生理盐水的表面皿中，松散覆盖后暂存，待移植时使用。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
解剖显微镜	任何具有可调节工作距离的解剖显微镜。
温水循环仪及适用于您手术/恢复区域尺寸的配套加热垫	Stryker/Gaymar	TP700	循环水垫可提供均匀且稳定的温度环境，适用于手术操作和术后恢复。
手术器械——用于进入生殖道的解剖器械			具体手术器械的选择高度依赖于外科医生的个人偏好
卵巢囊膜缝合材料	eSutures	2809G: 9-0 或 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER	若10-0缝线不慎掉落于手术区域，则较难寻获。
可吸收明胶海绵	辉瑞（PFIZER）	Gelfoam- PFIZER 09-0315-08	在无菌条件下切成小块（约2 mm）。
皮肤闭合用缝合钉	Becton Dickinson	MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)
眼用软膏	MWI Veterinary Supply Co.		Puralube 无菌眼用软膏
用于麻醉、镇痛和肾上腺素给药的注射器	MWI Veterinary Supply Co	BD 305536	27g × 3/8 in，皮内斜面，1/2 ml
用于生理盐水的注射器	MWI Veterinary Supply Co	BD 309657.	3 ml 注射器，鲁尔锁扣接头，27g 针头
电动剪毛器/刀头	Andis	Super AGR+™ 无线可拆卸刀头剪毛器，配 CeramicEdge® #40 刀头	任何配备精细刀头的电动剪毛器均可使用。
乙醇	大学化学试剂供应		使用时稀释至70%。
聚维酮碘溶液	MWI Veterinary Supply Co.	3233
2×2 纱布垫	MWI Veterinary Supply Co.	3073	与手术包一同高压灭菌
硼硅酸盐玻璃珠	Sigma-Aldrich Co	Z273619	置于辛提林瓶中进行高压灭菌
4-乙烯基环己烯二环氧乙烷	Sigma-Aldrich Co.	94956