$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 小鼠的准备及颈静脉插管
注意：此处使用雄性或雌性、5至7周龄的mTmG报告基因小鼠（B6.129(Cg) Gt(ROSA)26Sortm4(ACTBtdTomato,-EGFP)Luo10），与Pf4-cre小鼠杂交，可在巨核细胞和血小板中实现强烈的绿色荧光标记。实验开始前，需将显微镜的加热腔预热数小时。
- 将小鼠转运至成像室，并开始进行麻醉。
- 通过腹腔（i.p.）注射氯胺酮溶液（氯胺酮（100 μg/g）和赛拉嗪（10 μg/g））进行麻醉，剂量为 5 μL/g。
注意：此处采用重复给予氯胺酮/赛拉嗪的方法，效果良好，但需在记录过程中定期中断以重新注射。或者，若有麻醉机可用，可先使用氯胺酮/赛拉嗪诱导麻醉，随后通过吸入气体（异氟烷、空气和氧气的混合物）维持麻醉状态。
- 将小鼠放回笼中直至达到深度麻醉状态。之后将小鼠置于预热至 37 °C 的加热板上，后续所有操作均在此温度下进行。
注意：在等待小鼠进入深度麻醉期间，开启显微镜及所有设备，并设置实验所需参数，以便手术完成后立即开始实验。本实验流程持续约 3 小时，为终末性实验，小鼠在实验结束后直接实施安乐死，不再恢复意识。因此，使用乙醇对皮肤和器械进行消毒已足够。然而，根据各机构的具体规定，或若实验时间更长，则应采用更彻底的消毒方法，例如交替使用聚维酮碘（碘伏）和乙醇进行三次擦洗。
2. 在颈静脉中插入导管。
注意： 手术过程中应尽可能避免微生物污染。手术前务必使用70%乙醇（EtOH）仔细消毒皮肤。始终使用灭菌的剪刀和镊子，并定期用70%乙醇冲洗。应在清洁的环境中操作，并佩戴口罩。静脉注射使用22 G“套管针”导管，其结构为塑料管内含一根金属针（见材料表）。
- 将小鼠仰卧放置，用手术胶带固定其前肢以拉伸颈部（图1A）。用70%乙醇对颈部进行消毒。
注意：为方便操作，可在手术前剃除颈部毛发。若手术时间较长，必须仔细剃毛以确保无菌操作的规范性。
- 使用无菌剪刀在右侧或左侧颈外静脉上方做一长度为0.7–1 cm的切口。牵拉邻近结缔组织，暴露颈外静脉及胸肌顶部（图1A）。
- 用温热的无菌生理盐水充满导管。穿透胸肌后，将导管插入静脉（图1B）。
注意：注意避免导管内产生气泡。将导管穿过肌肉插入至关重要，因为肌肉可形成压迫点以防止出血。即使对于具有止血缺陷的小鼠（如Itgb3-/-小鼠），采用此方法插入导管也不会引起出血。
- 轻柔地取出针芯，必要时小心地将导管进一步推入静脉。连接注射器，并滴加一滴手术胶（材料表）以固定导管。
注意：也可将导管插入尾静脉，但因该静脉管径较小，需要一定操作经验。对于毛色较深的小鼠尤其困难，因其尾静脉几乎不可见。由于颈外静脉管径较大，将导管置于其中可更可靠地注射较大体积液体或进行重复给药。请注意，首次使用时注射器应先充满温热生理盐水，在注射药物溶液前切勿忘记先排出死腔体积。
- 小心将小鼠恢复至俯卧位（图1C）。在眼睛表面涂抹眼用凝胶（材料表）以防止角膜干燥。
