小鼠模型中胰腺活体成像窗口的安装：一种用于小鼠胰腺微结构延时活体成像的集成式胰腺成像窗口

摘要

来源：Park, I. 等 利用胰腺活体成像窗在小鼠模型中实现胰腺的稳定纵向活体细胞水平可视化。J. Vis. Exp. (2021)

本视频展示了植入胰腺成像窗口的操作步骤，该方法可将胰腺与肠道分离，从而实现对胰腺微结构进行长期、延时、高分辨率的成像观察。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术

1. 准备无菌手术平台，并用70%乙醇对表面进行消毒。
   注意：对于纵向成像实验，无菌操作技术至关重要。
2. 使用替来他明/唑拉西泮（30 mg/kg）与赛拉嗪（10 mg/kg）混合物对小鼠进行麻醉。
   注意：建议使用替来他明/唑拉西泮而非氯胺酮，因氯胺酮可能引起高血糖不良反应。应根据实验目的选择最适宜的麻醉方案。
3. 使用直肠探头配合恒温控制加热垫监测小鼠体温。
4. 剃除小鼠左侧 flank 区毛发，并交替使用酒精和碘伏进行三轮擦洗消毒。
   注意：若使用脱毛膏，停留时间不得超过1分钟，以防化学灼伤。
5. 在小鼠左侧 flank 区做一1.5 cm切口，分离皮肤与肌肉组织。
6. 在切口边缘使用黑色或尼龙4-0缝线行荷包缝合。
7. 在切口处使用微型牵开器，轻柔暴露脾脏。
8. 使用环形镊子小心托起脾脏，并辨认胰腺。
9. 将成像窗置于小鼠 flank 部位，使脾脏和胰腺穿过成像窗的开口区域。操作胰腺时必须极为轻柔，以免引起出血或胰腺炎。
   注意：应定制胰腺活体成像窗，以将胰腺与腹腔内的肠道隔离（图1A、B）。
10. 将胰腺轻柔地放置在成像窗的底板上；脾脏则置于成像窗的开口区域。
11. 在成像窗边缘滴加数滴N-丁基氰基丙烯酸酯胶水。
    1. 为减少胶水量，建议使用31 G导管针进行滴加。若液滴过大，可能导致组织意外粘附于成像窗或盖玻片上。
12. 将直径12 mm的圆形盖玻片轻柔地贴合至成像窗边缘。
13. 拉紧缝线环，使其嵌入成像窗的侧槽内，并打结三次固定。
14. 在结扎处尽可能靠近结节的近端剪断线头，以防止小鼠苏醒后紧绷的缝线受到干扰。
15. 让小鼠从麻醉中恢复（2–3小时），并注射酮洛芬（5 mg/kg，皮下注射于颈部基部或髋部的松弛皮肤处）以缓解疼痛。每12小时重新评估一次疼痛体征，根据需要每24小时重复给予酮洛芬，持续1–3天。
    注意：镇痛药物会影响葡萄糖刺激下的胰岛素分泌。镇痛药的选择与给药时机应根据实验目的个体化调整。
16. 将小鼠安置于垫料充足的笼具中，避免成像窗与笼壁接触。禁止将接受过窗口手术的小鼠与未接受手术的小鼠同笼饲养。

结果

图1. 胰腺活体成像窗口的设计与实物照片。 (A) 胰腺活体成像窗口的三维结构及横截面示意图。 (B) 胰腺成像窗口的前视图与后视图照片。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
圆形盖玻片	Marienfeld	111520	用于胰腺成像窗的盖玻片
IRIS剪刀	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	S-1107-10	该产品可用其他公司的产品替代
Loctite 401	Henkel	401	N-丁基氰基丙烯酸酯胶水
微型持针器	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	H-1126-10	该产品可用其他公司的产品替代
微型牵开器	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	17004-03	该产品可用其他公司的产品替代
微型镊子	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	该产品可用其他公司的产品替代
尼龙线 4-0	AILEE	NB434	不可吸收缝合线
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	用于血管导管，仅使用针头部分
胰腺成像窗	Geumto Engineering	定制订单	胰腺成像窗 - 定制订单
Physiosuite	Kent Scientific	PS-02	恒温控制器
环形镊子	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	该产品可用其他公司的产品替代
Rompun	Bayer	Rompun	麻醉剂
Zoletil	Virbac	Zoletil 100	麻醉剂
BALB/C Nude 	OrientBio 	BALB/C Nude	BALB/C Nude