活体成像：通过稳定成像窗口在细胞水平观察小鼠胰腺的方法

摘要

来源：Park, I. 和 Kim, P. 稳定化纵向 体内 利用胰腺活体成像窗口在小鼠模型中实现胰腺的细胞水平可视化 视频实验杂志 (2021).

在本视频中，我们介绍了通过稳定窗口对小鼠胰腺进行活体成像，以实现对细胞动态的长期可视化观察。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 活体成像

1. 开启活体显微镜及其激光电源。
2. 打开加热垫，并将恒温控制系统设置为 37 °C。
   注意： 若无恒温控制系统，可改用被动式加热垫或加热灯，并需频繁监测温度。
3. 取一只已预先植入胰腺观察窗的小鼠，通过肌肉注射给予替来他明/唑拉西泮（30 mg/kg）与赛拉嗪（10 mg/kg）进行麻醉。
   注意： 推荐使用替来他明/唑拉西泮而非氯胺酮，因后者可引起高血糖等不良反应。应根据实验目的选择最适宜的麻醉方案。
4. 插入血管导管以供注射。
   1. 用食指和中指压迫尾部近端，以替代止血带；必要时可用灯加热尾部。
   2. 用70%乙醇喷雾对尾静脉进行消毒。
   3. 将30 G导管插入尾侧静脉，可在PE10导管中观察到血液反流。
   4. 用丝线固定导管以保持稳定。
   5. 根据所用荧光探针的组合，适当注射FITC/TMR葡聚糖或其他荧光探针（如25 µg Alexa 647标记的抗CD31抗体）。
      注意： 若使用荧光标记抗体探针，建议在成像前2小时注射。
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结果

图1：胰腺活体成像窗口安装示意图。 将胰腺活体成像窗口植入小鼠体内，并将其固定于XYZ平移台中，成像室支架连接至倾斜支架后，再与胰腺成像窗口相连。© 2020 韩国糖尿病学会，《糖尿病与代谢杂志》（Diabetes Metab J）2020年 第44卷 第1期 第193–198页。经韩国糖尿病学会许可转载。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Alexa Fluor 647 琥珀酰亚胺酯（NHS 酯）	 Invitrogen	 A20006	 用于与抗体偶联的荧光探针
BD Intramedic 聚乙烯导管	 BD Biosciences	 427401	 用于与针头连接的 PE10 导管
C57BL/6N	 OrientBio	 C57BL/6N	 C57BL/6N
圆形盖玻片	 Marienfeld	 0111520	 用于胰腺成像窗的盖玻片
FITC 葡聚糖 2MDa	 Merck（原 Sigma Aldrich）	 FD200S	 用于血管识别
IMARIS 8.1	 Bitplane	 IMARIS	 图像处理
活体显微镜	 IVIM tech	 IVM-C	 活体显微镜
MIP-GFP	 The Jackson Laboratory	 006864	 B6.Cg-Tg(Ins1-EGFP)1Hara/J
胰腺成像窗	 Geumto Engineering	 定制订单	 胰腺成像窗 - 定制订单
Physiosuite	 Kent Scientific	 PS-02	 恒温控制器
TMR 葡聚糖 65-85kDa	 Merck（原 Sigma Aldrich）	 T1162	 用于血管识别
窗片固定器	 Geumto Engineering	 定制订单	 窗片固定器 - 定制订单
Zoletil	 Virbac	 Zoletil 100	 麻醉剂
Rompun 	Bayer 	Rompun 	麻醉剂