顺行灌注模型：一种用于离体小鼠心脏灌注的离体实验技术

摘要

来源：Omatsu-Kanbe, M. 等，一种从小鼠中分离心肌细胞的顺行灌流方法。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频介绍了一种对离体小鼠心脏进行顺行灌注的技术，其中灌注液通过左心室注入，最终灌注整个心肌。该方法可用于从小鼠模型中分离心肌细胞，并制备脱细胞心脏，以用于后续的下游应用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠心脏的顺行灌注

注意： 用于吸取心脏的塑料移液管应质地柔软，且尖端不应过于尖锐。选择带有锯齿的小型血管夹。推荐使用的器械见材料表。

1. 小鼠心脏的切除与主动脉夹闭
   注意： 应通过腹腔注射（i.p.）过量戊巴比妥钠（>300 mg/kg）联合肝素（8000 单位/kg）处死成年小鼠（>8 周龄）。
   1. 通过吸管快速吸出小鼠心脏
      1. 迅速打开胸腔以暴露心脏。剪切塑料移液管，使其尖端大小与暴露的心脏相近或略小（通常在距 0.5 mL 刻度约 1 cm 向尖端方向处剪断，但具体位置取决于心脏大小）。
      2. 将心脏吸入移液管中，抬高移液管以留出足够空间插入剪刀，然后从背侧使用弯头剪刀切除心脏，注意避免损伤心房。
      3. 立即将切除的心脏转移至含有冰浴 CIB-EGTA 的 30 mL 玻璃烧杯中，以终止收缩。该操作通常耗时 <1 分钟。
   2. 主动脉周围组织的清理
      1. 将心脏转移至盛有冰浴 CIB-EGTA 的 35 ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
延伸管	Top, Japan	X1-50	用于连接注射器和注射针，进行顺行灌注。
加热垫	Natsume Seisakusho, Japan	KN-475-3-40	用于加热灌注板的设备。
输液泵	TERUMO, Japan	TE-311	用于顺行灌注的注射器输液泵。
注射针（27 号）	TERUMO, Japan	NN-2719S	用于插入左心室。
胰岛素（牛胰来源）	Sigma-Aldrich, USA	I5500	溶于 0.1 M HCl 中。
塑料注射器（20 mL）	TERUMO, Japan	SS-20ES	用于输注 CIB-EGTA。
血管夹	Karl Hammacher GmbH, Germany	HSE 004-35	小型直型血管夹，用于夹闭主动脉。
其他所有试剂	Nacalai Tesque, Japan