小鼠腹股沟淋巴结体积分析：一种利用超高频超声成像技术测定小鼠模型腹股沟淋巴结体积的方法

摘要

来源：Vitiello, M. 等., 利用超高频超声成像分析Braf/Pten基因工程小鼠黑色素瘤模型中的淋巴结体积. J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们展示了利用超高频超声成像技术在小鼠模型中对腹股沟淋巴结进行成像的方法。这种非侵入性成像技术可实现对活体动物淋巴结体积随时间变化的动态监测。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 成像步骤

1. 将小鼠放入气体麻醉诱导室，通入3%异氟烷与纯氧混合气体，直至小鼠完全麻醉。通过夹捏足垫无反应来确认麻醉深度。
2. 将动物转移至加热板——超高频超声（UHFUS）成像系统的一个组成部分——并使其保持仰卧位。使用涂有凡士林的直肠探针测量体温，并调节加热板温度，使小鼠体温维持在生理范围（36 ± 1°C）。
3. 用兽用眼膏润湿小鼠眼睛，防止麻醉期间角膜干燥。通过小鼠鼻罩持续供给麻醉气体（1.5%异氟烷与纯氧混合气体），并根据需要调整异氟烷浓度，以维持适当的麻醉深度。
4. 在前肢和后肢足垫涂抹导电膏，并将其固定于加热板内置的ECG电极板上。检查生理参数（心率、呼吸信号和核心体温）是否被正确采集并显示。
5. 使用脱毛剂去除双侧腹股沟区域的毛发，并涂抹超声耦合介质。
6. 将UHFUS线性探头（中心频率40 MHz）安装至UHFUS成像系统内置的专用三维电机上，以实现探头的自动步进式移动。
7. 正确调整超声探头的方向与位置，获取腹股沟淋巴结（左侧/右侧）的短轴图像，并将感兴趣区域置于焦点范围内。
8. 按照前述方法，以一系列二维B模式图像扫描整个腹股沟淋巴结体积。通过微米级步长的线性移动换能器，在多个层面采集图像，从而生成基于自动呼吸和心电门控的动态影像序列（cine loops），用于三维数据重建。
9. 设置图像采集参数如下：扫描距离范围为2至5 mm（根据淋巴结大小而定）；步长为44 µm，每只小鼠获得46–114个扫描步/淋巴结切片，采集时间为1–3分钟。将采集的图像以原始格式（DICOM）进行数字存储，用于后续离线分析。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) 小鼠	The Jackson Laboratory	13590
Blu 凝胶	Sooft Ialia		眼科用溶液凝胶
IsoFlo（异氟烷）	Zoetis		气体麻醉用液体
Sigma 凝胶	Parker		电极凝胶
Transonic 清澈凝胶	Telic SAU		超声耦合凝胶
Veet	Reckitt Benckiser IT		脱毛霜
Compact Dual 麻醉系统	Fujifilm, Visualsonics Inc.		基于异氟烷的麻醉系统，配备鼻罩和诱导室
MX550S	Fujifilm, Visualsonics Inc.		超高频超声线性探头
Vevo 3100	Fujifilm, Visualsonics Inc.		超高频超声系统
Vevo 成像工作站	Fujifilm, Visualsonics Inc.		超高频超声成像工作站及配备加热板的生理监测单元
Vevo Lab	Fujifilm, Visualsonics Inc.		超声图像后处理软件平台