从小鼠中提取视网膜杯：一种获取完整小鼠眼球视网膜杯的外科手术方法

摘要

来源：Jiang, K. 等 离体视网膜组织样本中线粒体呼吸和糖酵解的测定 J. Vis. Exp (2021)

本视频介绍了一种从小鼠眼球中分离出不含外层覆盖组织的视杯的实验方案。所提取的视网膜组织可用于研究视网膜细胞中发生的多种代谢通路。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 视网膜杯解剖

1. 根据机构的安乐死指南，通过 CO₂  窒息法处死小鼠。
   注意：不得将动物留在 CO₂  室内超过安乐死所需时间。
2. 摘除眼球并置于培养皿中的冰上预冷的 1× PBS 缓冲液中，然后将其置于解剖显微镜下。
3. 用显微剪小心剪除眼球外侧附着的额外直肌，并剪断视神经。
4. 使用 30 G 针头在角膜边缘（角膜缘）处穿刺一个小孔，作为显微剪的插入位点；然后使用精细解剖显微剪沿角膜边缘进行环形切割，将其与眼球后部的视杯分离。
5. 使用锋利的解剖镊将角膜、晶状体和玻璃体从视杯上移除。
6. 使用精细解剖显微剪在视杯边缘的巩膜层上做数个小切口，注意避免损伤视网膜层。用两把锋利的解剖镊分别夹住切口两侧的巩膜组织，小心地牵拉巩膜层，将其从神经视网膜上剥离。沿视杯周围重复此操作，直至完全去除巩膜，获得完整无损的视网膜杯。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1X PBS	Thermo Fisher	14190-144
30 号针头	BD Precision Glide	305106
活检打孔器，1 mm	Integra Miltex	33-31AA
CO2 窒息装置
解剖镊 - Dumont #5	Fine Science Tools	11251-10	直头
解剖镊 - Dumont #7	Fine Science Tools	11274-20	弯头
解剖显微镜
Graefe 镊	Fine Science Tools	11051-10	弯头，带齿
显微剪刀	Fine Science Tools	15004-08	弯头