小鼠尾部淋巴水肿模型：一种在小鼠体内诱导持续性淋巴水肿的实验技术

摘要

来源：Hassanein, A. H. 等，一种小鼠尾部淋巴水肿模型。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频介绍了一种在体内建立小鼠尾部淋巴水肿的实验技术，该模型表现为间质组织间隙内异常的液体积聚，导致尾部肿胀。该模型可用于研究淋巴水肿的发生机制及治疗方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠尾部淋巴管的手术破坏

1. 使用性别分布相等的8周龄C57BL/6小鼠。
2. 将小鼠置于诱导室中，以100%氧气混合3-4%异氟烷进行全身麻醉诱导，术中维持1-3%异氟烷镇静。
3. 皮下注射0.5 mg/kg缓释型（SR）布托啡诺以控制疼痛。
   注意：术后可额外给予镇痛药物：卡洛芬每24小时一次，至少持续48小时；布比卡因在切口完成后或缝合切口前单次给药，滴加于皮肤边缘（作用持续4–6小时）。
4. 将小鼠仰卧位固定，并用70%异丙醇对尾部进行消毒处理。
5. 在手术前使用游标卡尺从尾根部起始每5 mm测量一次尾部直径，起始点为距尾根20 mm处。这些测量数据将用于通过截头圆锥公式计算体积。
6. 在距尾根部20 mm处标记一个3 mm宽的环形切除区域。
7. 在手术显微镜放大下，使用无菌手术刀片（15号）精确切除3 mm全层皮肤，保留其下方所有血管结构完整。首先在距尾根20 mm处沿环形标记切开真皮层，随后在其远端3 mm处进行第二个环形全层切口。
   1. 作一条垂直的全层纵向切口以连接上述两个切口。使用齿状精细镊子夹住一侧边缘，用显微剪刀小心地在无血管平面内深入分离至真皮层，并位于静脉外膜浅层。
8. 在尾尖近端皮下注射0.1 mL 1%伊文思蓝溶液。
9. 在手术显微镜下识别位于尾侧静脉旁的两条淋巴管。由于注射了伊文思蓝，淋巴管呈现蓝色。使用直型显微外科剪刀切断淋巴管。先用剪刀仔细分离侧静脉与淋巴管之间的间隙，然后将一侧剪刀尖端插入淋巴管与侧静脉之间，闭合剪刀以切断淋巴管。
10. 用无菌粘性透明敷料包扎尾部伤口。术后每日检查切口，确保无感染或出血，并持续进行伤口护理2周。
11. 将动物单独饲养，以防止尾部再次受伤，并避免动物相互啃咬，从而减少手术并发症的发生。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
手术显微镜	Leica, Wetzlar, Germany	MSV266
粘性敷料（Tegaderm）	3M, St. Paul, Minn.	1626W
C57BL/6 小鼠	Jackson Laboratories	664
显微有齿镊 - 1x2 齿	Fine Science Tools (USA) Inc.	11019-12
一次性针头 30G×1	Fischer Scientific	305128
手术剪	Fischer Scientific	12-460-796
异硫蓝（Lymphazurin）50 mg/5 ml	Mylan	67457-220-05