基于纤维插入的短暂性脑卒中模型：一种在小鼠脑内实施大脑中动脉阻塞的手术方法

摘要

来源：Llovera, G.，等。小鼠脑卒中模型：经由颈外动脉进行短暂性大脑中动脉阻塞。J. Vis. Exp (2021)。

本视频介绍了利用硅涂层缝合丝阻塞大脑中动脉，在小鼠模型中建立短暂性脑卒中的操作步骤。 该模型可模拟人类脑卒中，有助于研究治疗脑卒中的新型治疗策略。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会以及 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. 材料与仪器的准备

1. 连接加热毯，以在麻醉期间维持手术区域及小鼠体温在 37 °C。
2. 将剪刀和镊子进行高压灭菌，准备 70% 乙醇溶液，并备好泛醇眼膏、若干棉片以及 5-0 涂层编织聚酯缝合线以供使用。准备一支 1 mL 注射器，内含 0.9% 生理盐水溶液（不带针头），用于保持动物切口部位湿润。准备麻醉气体（100% O₂ + 异氟烷）。
3. 通过截取 10 µL 移液器吸头的尖端（3–5 mm 长度）制作用于固定激光多普勒探头的支架。
   注意：所有器械均使用热珠灭菌器进行灭菌。手术前后均使用微生物消毒喷雾对表面进行消毒。术前使用伤口消毒喷雾对小鼠头部和胸部周围区域进行消毒。

2.  激光多普勒仪的准备

1. 在手术前30分钟向小鼠注射镇痛剂（卡洛芬4 mg/kg和布托啡诺0.1 mg/kg，腹腔注射）。
2. 将小鼠置于诱导室中，以4%异氟烷气流麻醉，直至其自发身体运动和触须活动停止。
3. 将小鼠俯卧位固定于手术区域，鼻部置于麻醉面罩中。维持异氟烷浓度为4%持续一分钟，随后降低并维持在2%。
4. 设置配套的反馈控制加热垫，以维持小鼠体温在37 °C，并轻轻插入直肠探头，全程监测手术期间体温。
5. 在双眼上涂抹右泛醇眼膏。
6. 用70%乙醇对左眼和左耳周围的皮肤及毛发进行消毒。
7. 在左耳与左眼之间切开头皮（长约1 cm），暴露颅骨。
8. 切开并分离颞肌，以显露颅骨下方的中脑动脉（MCA）。
9. 用胶水将激光多普勒探针/光纤的持针器外端固定在左脑中动脉上方。随后，用胶水将皮肤缝合，封闭持针器周围的切口。滴加2-3滴固化胶以加快固化。确保激光多普勒光纤未被粘固，可随时轻松从持针器中取出。

3. 短暂性大脑中动脉闭塞模型（阻塞）

1. 将小鼠置于仰卧位，把其鼻部放入麻醉锥中，并用胶带固定四肢。
2. 消毒胸部周围的皮肤和毛发，在颈部正中做一条长约2 cm的切口。
3. 使用镊子分离皮肤和 下颌下腺，用牵开器固定胸锁乳突肌， 暴露手术视野，找到左侧颈总动脉（CCA）。将颈总动脉从周围结缔组织和神经中游离出来（注意不损伤迷走神经），并在分叉前进行暂时性结扎。
4. 游离颈外动脉（ECA），在其最远端可见处打永久结扎结。在靠近分叉处的颈外动脉下方穿另一根缝线，留松结备用。
5. 游离颈内动脉（ICA），并在分叉上方约5 mm处放置微型血管夹。操作时注意避免损伤迷走神经。
6. 在紧结与松结之间的颈外动脉上剪一小孔，注意不要完全剪断颈外动脉。
7. 插入线栓并沿颈外动脉向颈总动脉方向推进。收紧颈外动脉上的松结，将线栓暂时固定于该位置，以防止移除微型血管夹时发生出血。 
8. 移除微型血管夹，继续将线栓经颈内动脉推进，直至激光多普勒血流仪检测到脑血流量急剧下降（>80%），提示已到达大脑中动脉（MCA）起始处。通过进一步收紧颈外动脉上的结扎线，将线栓固定在此位置。
   注意：当线栓沿正确方向推进时，应能顺畅前进，无明显阻力。
9. 记录插入线栓前后激光多普勒的血流值。
10. 取出牵开器，复位胸锁乳突肌和下颌下腺，缝合切口。移除激光多普勒探头，将动物置于37 °C的恢复舱中1小时（直至取出线栓）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
45° 斜坡	H&S Kunststofftechnik		高度：18 cm
5/0 缝合线	Pearsalls	10C103000
异氟烷麻醉系统	Drager
Bepanthen 软膏	Bayer
C57Bl/6J 小鼠	Charles River	000664
钳子	FST	12500-12
夹子	FST	18055-04
夹子 holder	FST	18057-14
棉签	NOBA Verbondmitel Danz	974116
70% 乙醇	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
96% 乙醇	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
99% 乙醇	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
细丝	Doccol	602112PK5Re
精细 45° 角镊子	FST	11251-35
精细镊子	FST	11252-23
精细剪刀	FST	14094-11
胶水	Orechseln	BSI-112
胶水固化剂	Drechseln & Mehr	BSI-151
加热毯	FHC DC Temperature Controller
异氟烷	Abbot	B506
异戊烷	Fluka	59070
激光多普勒仪	Perimed	PF 5010 LDPM, Periflux System 5000
激光多普勒探头	Perimed	91-00123
恢复室	Mediheat
硅涂层细丝	Doccol	602112PK5Re
Vannas 弹簧剪刀	FST	15000-00