小鼠腰椎不稳模型的外科诱导：小鼠腰椎棘突及其连接韧带切除手术操作

摘要

来源：Liu, S. 等。腰椎不稳的小鼠模型。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们描述了一种通过切除腰椎L3至L5棘突以及棘上韧带和棘间韧带，在小鼠模型中诱导腰椎不稳的手术方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 术前准备

1. 器械灭菌：手术前将手术器械放入高压灭菌器中进行蒸汽灭菌（121 °C，15 分钟）。将器械装入金属容器中，并保持无菌状态直至手术使用。
2. 手术平台设置：分配至少 60 cm × 60 cm 的台面区域用于手术操作。用 75% 酒精清洁台面，并覆盖一次性医用毛巾。在台面上部 1/3 区域放置无菌手术器械包、试剂和手术用品。剩余 2/3 区域保持洁净，用于手术操作。在手术垫下方添加加热垫以提供保温支持。
3. 动物准备
   1. 将动物（C57BL/6J 小鼠，雄性，8 周龄）放入诱导室中。开启麻醉蒸发器，异氟烷浓度设为 4%，氧气流速为 4 L/min 进行诱导麻醉。动物完全麻醉后，通过鼻罩维持麻醉，术中异氟烷浓度为 1.5%，氧气流速为 0.4 L/min。术中持续监测动物呼吸情况。
   2. 涂抹盐酸氯四环素眼膏，防止手术期间角膜干燥。
   3. 使用小型动物修剪器，剃除小鼠背部从下胸部至骶部顶端的手术区域毛发。用纸巾擦拭去除剃除的毛发。
   4. 在剃毛区域涂抹脱毛膏，停留时间不超过 3 分钟。用纱布擦去脱毛膏，并用 2 mL 0.9% 无菌生理盐水冲洗。
   5. 在小鼠腹部下方放置定制的圆柱形手术垫（图 1A），以抬高腰椎，便于手术操作。

2. 暴露腰椎第三至腰椎第五（L₃–L₅）棘突

1. 用食指触诊腰椎的皮下棘突，其位置相对更偏外侧，并与胸椎和骶椎进行比较，以确定腰椎区域。
2. 使用75%酒精清洗皮肤。用手术刀片在腰部区域沿中线做一长度为3–4 cm的切口，从胸中段延伸至髋部，以暴露筋膜。
3. 通过附着于棘突尖端的后侧筋膜形态来识别腰椎。具体而言，第三腰椎（L₃）至第一骶椎（S₁）的筋膜因其呈“V”形而与其他筋膜相区别。最后一个“V”形尖端连接第一骶椎（S₁）筋膜，第一个“V”形尖端对应于L₃棘突（图1B）。
4. 用手术刀片在两侧沿L₃至L₅棘突外侧做后侧椎旁肌切口（图1C）。控制切口深度至关节突水平，以减少出血。
5. 使用两把眼科镊子分离肌肉层，暴露L₃至L₅的棘突及棘上韧带。

3. 切除第₃至第₅腰椎棘突及其附着韧带

1. 使用维纳斯剪刀切断棘间韧带，分离各个棘突（图1D）。
2. 使用维纳斯剪刀将L₃–L₅棘突连同棘间韧带一并切除（图1E）。
3. 用无菌编织丝线（缝线规格5.0）缝合皮肤切口，无需重新附着椎旁肌。
4. 在手术部位涂抹盐酸氯四环素眼膏。

结果

图1： L3–L5棘突暴露及LSI手术操作。 （A）将定制的圆柱形垫片置于小鼠腹部下方。（B）暴露腰筋膜，并通过“V”形结构识别L3至S1棘突。（C）在L3至L5棘突两侧作外侧椎旁肌切口。（D）切断棘间韧带，逐个暴露棘突。（E）切除L3–L5棘突及其间的棘间韧带和棘上韧带。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
盐酸金霉素眼膏	上海通用药业股份有限公司	H31021931	预防眼部干燥，预防伤口感染
C57BL/6J 雄性小鼠	天江药业有限公司（江苏，中国）	SCXK2018-0004	动物模型
一次性医用垫巾	河南华昱医疗器械有限公司	20160090	手术操作平台
吸入式麻醉设备	MIDMARK	Matrx 3000	麻醉
异氟烷	深圳瑞沃德生命科技有限公司	1903715	麻醉
盐酸利多卡因	山东华鲁制药有限公司	H37022839	镇痛
医用缝合针	上海浦东金环医疗用品有限公司	20S0401J	缝合皮肤
眼科镊	上海医疗器械（集团）有限公司手术器械厂	JD1050	夹持皮肤
眼科剪刀（10 cm）	上海医疗器械（集团）有限公司手术器械厂	Y00030	皮肤切口
编织丝线	上海浦东金环医疗用品有限公司	11V0820	缝合皮肤
小型动物剃毛器	上海飞科电器有限公司	FC5910	脱毛
无菌手术刀片（12#）	上海浦东金环医疗用品有限公司	35T0707	肌肉切口
薇婷脱毛膏	利洁时家化（印度）有限公司	NA	脱毛
维纳斯剪刀	明仁医疗器械	长度：12.5 cm	剪切肌肉和棘突