小鼠模型中的结肠镜引导捏活检:一种从小鼠结肠中可视化和提取组织样本的技术

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 结肠镜检查和伤口诱导

1. 首先将 1.9 毫米硬孔内窥镜插入护套，预组装内窥镜的组件（图 1A-B）。使用提供的管道将气泵（以提供结肠吹入）连接到工作通道旁边护套左侧的气阀上（图 1C）。
   注意:虽然这里描述的镜头是 0°，但 30° 镜头也可以用于此目的。
2. 确保工作通道处于打开位置，并通过工作通道插入 3 Fr 活检钳并将其推进至护套末端（同时确保它不会从护套中伸出）（图 1C）。按照制造商的说明将组装好的内窥镜连接到光源和视频成像设备上。
3. 在诱导室中用 5% 异氟醚和氧气麻醉小鼠。然后将鼠标移动到内窥镜分期平台，该平台在其腹侧包含加热系统（以防止体温过低），并使用含 2% 异氟醚和氧气的鼻锥保持麻醉。在眼睛上添加兽医软膏，以防止麻醉时干燥。通过轻轻捏住后脚以测试反射，确保鼠标完全麻醉。
   注意:小鼠的任何品系或任一性别都可以使用这种技术;但是，小鼠最好至少 8 周大，这样它们就足够大了。
   1. 在眼睛上添加兽医软膏，以防止麻醉时干燥。
   2. 通过轻轻捏住后脚以测试反射，确保鼠标完全麻醉。
4. 用附带的大鼠管饲针填充 3 mL 注射器，加入室温磷酸盐缓冲盐水 （PBS）。将针头插入小鼠肛门约 1 cm，轻轻注入 PBS 以清除粪便。几个粪便颗粒应该与输注的 PBS 一起从小鼠中排出。
   注意:滴注过量的 PBS 会导致管腔中形成泡沫，从而可能掩盖管腔的观察。
5. 将组装好的内窥镜插入小鼠肛门 0.5 厘米。将活检钳推进直肠腔，直到镊子的整个"钳口"（包括铰链）超出鞘的末端（如视频监视器上观察到的）。将镊子旋转 90°，使钳口以东西方向打开。
6. 活检时，打开镊子并前进约 1 厘米，关闭镊子，然后以一个平稳的动作快速拉回镊子，同时保持镊子闭合。
   1. 进行活检时避免完全吹入结肠。因此，在此步骤中，请保持燃气阀的右侧打开;尽管应该注意的是，打开镊子时，当结肠处于此位置时，存在损坏粘膜的风险。

图 1:进行活检所需的物品。（A） 晶状体 （a）、鞘 （b） 和活检钳 （c） 的图像。（B） 将晶状体插入护套。（C） 将镊子插入护套的工作通道（实心箭头）。虚线箭头表示气泵连接的正确位置。