结肠镜引导的小鼠伤口模型：一种通过分离结肠活检诱导的伤口床以研究愈合过程的方法

摘要

来源：Montrose, D. C.，等。在小鼠中进行结肠镜引导下的钳取活检并评估后续组织变化。J. Vis. Exp. (2021)。

在本视频中，我们描述了一种在适当时间点分离结肠镜诱导的创面床以进行详细分子分析的方法。该分析有助于理解胃肠道炎症条件下创面愈合的过程。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 用于分子分析的伤口床采集

1. 在活检后的选定日期，采用 CO₂ 窒息法对小鼠实施安乐死，随后进行颈椎脱位（或等效技术）。
2. 切开皮肤和腹肌以暴露体腔，取出结肠远端。将闭合的剪刀置于结肠下方，轻轻提起以分离其下方的肠系膜，然后在结肠中点及肛门处剪断，将结肠从鼠体中移除。
3. 使用连接20 mL注射器的鼠用灌胃针，以预冷的1×PBS冲洗肠腔内容物，随后将结肠平铺于滤纸上。
4. 在滤纸上沿纵轴剪开结肠，确保肠系膜面朝下紧贴滤纸。当组织仍在滤纸上时，用压滴管将0.2%亚甲蓝溶液滴加至黏膜表面，随后去除多余染液。在解剖显微镜下观察结肠，定位伤口床（图1A）。
5. 使用4英寸微型虹膜剪，在伤口床边缘周围进行剪切（图1A，虚线圆圈），注意避免切穿肌层（除非需要保留肌层），然后用精细镊子将分离的伤口床转移至离心管中，进行速冻或按所需方式储存。
   注意： 以此方法采集的组织量足以用于提取RNA，进行RNA-seq或类似分析。

结果

图1： 伤口床的离体及切片图像。（A）从小鼠体内取出结肠组织，取材时间为活检后第2天，用0.2%亚甲蓝染色后在解剖显微镜下成像。虚线圆圈标示伤口床的边缘。黑色线条指示在包埋切片前正确切开伤口床/结肠的位置。（B）伤口床的H&E染色切片代表性图像。星号标示伤口床区域，箭头指示紧邻伤口床的完整隐窝，用于界定损伤区域的边界。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
活检钳，3 Fr	Karl Storz	61071ZJ
异氟烷	Covetrus	2905
亚甲蓝	Sigma-Aldrich	M9140
显微虹膜剪刀	Integra	18-1619
带#10刀片的手术刀	Hill-Rom	372610