小鼠回肠袢模型:研究小鼠肠道通透性的手术模型

摘要

来源:Boerner， K. 等人 使用标准化肠袢模型对小鼠肠道通透性和中性粒细胞跨上皮迁移进行功能评估。

该视频演示了如何生成回肠袢模型，以研究小鼠模型中的肠道通透性。这种方法提供了一个实时模型来了解上皮屏障功能和随之而来的免疫反应。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 回肠袢的产生

1. 皮肤准备:用酒精棉签或浸泡了 70% 乙醇的纱布海绵擦洗腹部中线的皮毛。不要用酒精弄湿大面积的皮毛，以防止体温过低。
2. 使用剪刀进行中线剖腹手术。在腹部中间（约 2 厘米长）做一个垂直切口，露出腹膜。小心不要伤害腹腔内器官。
3. 将预先剪好的湿棉纱布放在暴露的腹腔上。
4. 使用湿棉签动员盲肠并使其外侧。小心地将盲肠放在湿棉纱布上。
   注意:盲肠位于大多数小鼠腹腔的左尾象限，与动物的性别无关。
5. 使用湿棉签动员并轻轻地将末端部分（远端）连接到盲肠的回肠外出（图 1B）。
6. 在湿棉纱布上部署至少 6 cm 的末端回肠，而不会中断肠系膜血管和血液供应。如果没有出血，则维持血液供应，并且组织保持其粉红色（图 1B><）。 注意:使用预装在黄色饲管上的 10 mL 注射器，用温热的 HBSS（每 2 - 3 分钟）始终保持组织湿润，避免暴露的组织干燥。
7. 在盲肠附近，确定肠系膜中的主要动脉，为回肠供血。然后在肠系膜中找到两个没有关键血管的连接部位。
8. 使用钝组织镊子，牢牢抓住末端回肠（最靠近盲肠），并使用细尖镊子，在肠系膜上开孔，避开血管。将蚕丝缝合线穿过穿孔并打一个手术结以创建第一个结扎（环的远端）。
9. 使用尺子测量距离第一条连字 4 cm 的地方，并按照步骤 2.8 中的说明创建第二条连字（环的近端）（图 1C）。
10. 用细剪刀小心地剪在每个结扎处旁边，以隔离 4 cm 的回肠袢，保持完整的血液供应和肠系膜。
    注意:切掉 iLoop 外部段的两端，然后轻轻冲洗作为防止干扰管腔内容物（粪便）的必要步骤，从而促进 FITC-葡聚糖或趋化刺激在分离段的整个长度上均匀分散，并允许通过流式细胞术更准确地定量白细胞。该程序还允许在注射指定体积的试剂后粘膜均匀膨胀，并在动物之间具有更好的可重复性。
11. 使用连接到 10 mL 注射器的柔性黄色饲管，用温热的 HBSS 轻轻冲洗回肠袢段的内容物。
12. 使用丝缝合线连接冲洗的回肠袢的两个切割端。
13. 使用带有 30 G 针头的 1 mL 注射器将 250 μL 试剂（如 FITC-葡聚糖或趋化因子）缓慢注入肠腔。回肠袢会膨胀，导致粘膜中度膨胀（图 1D）。
    注意:将试剂注射到肠系膜动脉对侧的环形管腔中。注射时注意不要从动物身上拉出回肠袢，以免撕裂血管并诱发出血。
14. 使用湿棉签轻轻放回回肠袢、回肠近端和盲肠。
15. 使用持针器、解剖钳和 3.0 不可吸收蚕丝缝合线和反向切割针来闭合腹壁。
16. 将动物置于温度调节的麻醉室中孵育。

结果

图 1:回肠袢模型。（A） 回肠袢模型的示意图概述。在麻醉下对小鼠进行正中剖腹手术，并将其放置在温控手术板上。（B） 盲肠 （*）、回肠和肠系膜的外化。确定了两个合适的连接位点 （1,2）。（C） 隔离一段 4 cm 长的线段:第一根结扎线 （1） 放置在靠近回肠盲肠交界处的位置，第二根结扎线 （2） 放置在距离第一根结扎线 4 cm 处。（D） 在肠系膜 （1， 2） 做两个小切口，形成一个 4 厘米长的回肠袢。去除管腔内容物并结扎切口末端后，可以将荧光标记物和化学引诱剂等试剂注射到管腔中。回肠袢血管丰富（黑色箭头）。

材料