在猪模型中定位大池：一种用于直接插管的大池入路手术方法

摘要

来源：Bèchet, N. B.，等。猪小脑延髓池直接导管植入术。J. Vis. Exp. (2021)。

在本视频中，我们介绍了一种在猪模型中获取小脑延髓池的方法。小脑延髓池是脑脊液相关研究的首选部位。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物准备

1. 通过肌肉注射（i.m.）给予替来他明（3.75 mg/kg）和唑拉西泮（3.75 mg/kg）以及右美托咪定（37.5 μg/kg）使猪镇静。等待其意识丧失。
2. 将一根20 G导管插入耳缘静脉，建立静脉通路。
   注意：通过导管注入5–10 mL生理盐水，确认导管位于静脉内。若误穿出静脉，可在耳部组织出现轻微水肿以资识别。
3. 对猪进行气管插管，以确保在整个手术过程中可调控呼吸频率。
   注意：通过按压猪的胸壁并确认有气体从气管插管中被强制呼出，以验证插管成功。
4. 将气管插管连接至呼吸机，设定呼吸频率为14次/分钟。
5. 将脉搏血氧仪探头和血压袖带连接至尾部，以监测心率（HR）、血压（BP）和血氧饱和度（sats）。插入直肠温度计以监测核心体温。
6. 准备含有氯胺酮（5 mg/kg/min）、咪达唑仑（0.25 mg/kg/min）和芬太尼（2.5 μg/kg/min）的生理盐水静脉输液袋，并通过耳缘静脉以约每秒2滴的速度开始输注。
   注意：在整个手术过程中，应根据动物的生命体征调整输注速率，可能需要逐步增加或减少。
7. 将猪置于俯卧位，触诊其头部和颈部背面，定位并标记枕骨嵴、第一胸椎棘突以及双耳基底部。
8. 沿纵轴方向在枕骨嵴与胸椎棘突之间画一条直线。再沿颅底从枕骨嵴分别向两侧耳基底部各画一条线（图1A）。
9. 通过轻轻夹捏尾部并观察是否出现尾部反射，检查动物是否处于深度麻醉状态。
   注意：若动物仍存在反射，应逐步增加麻醉药物输注速率，直至反射消失。

2. 手术

注意：在整个手术过程中，必须至少有一名助手负责吸除轻微出血，并对任何切断的血管进行电凝止血。

1. 使用带有#21刀片的手术刀，沿纵轴线向下至肌肉层做皮肤切口。
2. 从肩部继续做两个垂直于纵轴的皮肤切口，长度为10–15 cm。
3. 从枕骨嵴处开始，沿纵轴线向下至两侧耳基部做皮肤切口。
4. 用解剖镊夹住枕骨嵴处形成的皮肤角，用手术刀刀片轻轻在筋膜上滑动，从头侧向尾侧小心地将皮肤与下方肌肉分离。完成五处切口后的皮肤剥离后，应可见部分斜方肌。
5. 用手术刀在斜方肌于中线汇合处做一纵向切口，深度约1 cm。
   注意：切割肌肉时较易出血，应备好电凝器。若切断较大血管，一人应迅速用纱布压迫止血，另一人立即使用电凝器止血。
6. 结合使用直头和弯头手术镊，沿肌肉的纵行切口进行钝性分离。此操作可分开斜方肌肌腹以及其下方的头半棘肌二腹肌。
7. 用手术刀切断任何残留的肌肉纤维，并继续钝性分离，直至头半棘肌复合肌清晰可见。
8. 在颅骨后部切断斜方肌和头半棘肌二腹肌的起始附着点。用手术刀沿纵轴进行钝性分离，小心地将其与下方结构分开，直至头半棘肌复合肌完全暴露。
9. 使用自持式牵开器将斜方肌和头半棘肌二腹肌牵开。
10. 在头半棘肌复合肌肌腹于中线汇合处，用手术刀做一纵向切口，深度约1 cm。
    注意：此处需警惕可能的额外出血。出血可用棉签压迫结合电凝处理。
11. 使用手术镊沿肌腹之间的纵行切口进行钝性分离，直至可触及寰椎（CI）的背侧表面。
12. 在颅骨后部切断头半棘肌复合肌的起始附着点，并用手术刀结合钝性分离，沿纵轴将其与下方椎体分离。
13. 使用另一组自持式牵开器将头半棘肌复合肌牵开。
14. 用手术刀小心去除寰椎与颅底交界区域上方残留的任何组织。
15. 将一只手置于动物颈部下方，另一只手的一根手指置于寰椎与颅骨连接处，同时抬起头部并屈曲颈部，用手指触诊，另一只手协助暴露小脑延髓池。
    注意：触诊时，小脑延髓池表现为具有较强弹性、在手指松开压力后略有回弹感的致密结构。

结果

图1. 猪小脑延髓池插管术。（A）手术开始前已准备就绪的猪，标记了皮肤切口位置，切口从枕骨嵴（OC）开始，延伸至胸椎（TV）后方，并至两侧耳基（EB）外侧。（B）头部处于放松位置，牵拉斜方肌、头半棘肌双腹肌及头半棘肌复合体肌肉，从而暴露小脑延髓池（CM）。（C）手动屈曲头部以增加对小脑延髓池（CM）的接触，便于插管和注射。（D）插管插入小脑延髓池（CM）后的局部放大图像，插管通过牙科水泥（DC）固定在位。（E）荧光成像后的大脑背侧、腹侧和外侧表面图像，附带相应的白光结构图像。在这些表面可见的兴...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
解剖镊	NA	NA
标记笔	NA	NA
21号手术刀片	Agnthos	BB521
4号手术刀柄	Agnthos	10004-13
自持式拉钩	NA	NA
外科镊	NA	NA