通过小脑延髓池插管向猪的小脑延髓池递送示踪分子：一种荧光示踪分子递送方法 关键词：示踪分子，小脑延髓池，插管，荧光示踪剂，脑脊液，猪，中枢神经系统，药物递送

摘要

来源：Bèchet, N. B.，等。猪小脑延髓池直接导管植入术。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频介绍了通过直接插管猪脑小脑延髓池以递送示踪分子的实验方案。该方法有助于可视化脑脊液在类淋巴系统中的分布情况。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 插管与注射

注意：此步骤至少需要两人操作，并在动物头部抬高、颈部屈曲的体位下进行。

1. 以一只已麻醉的猪开始操作，该猪此前已接受手术，使其小脑延髓池可被外科途径接触。
2. 确保一人抬起并屈曲动物的头颈部，同时另一人触诊小脑延髓池位置，并记录其解剖位置。
3. 将一根22 G的导管以相对于纵轴倾斜的角度缓慢而小心地穿过硬脑膜，插入小脑延髓池。
   注意：切勿将导管插入过深，以免造成脑组织损伤。导管应插入多深需通过经验判断，关键在于体会导管刺穿硬脑膜时的手感。实际上，一旦导管穿透硬脑膜，即已达到成功注射示踪剂所需的深度。该深度约为3–5 mm，但会因动物体型或年龄不同而有所差异。成功置管后，应立即可见清亮、搏动的脑脊液沿导管上升。为获得最佳效果，建议在已实施安乐死的动物上预先练习多次置管操作，以熟悉硬脑膜穿刺的手感。
4. 将针芯从小儿延髓池导管中撤出，并在导管锁上安装帽盖。
5. 首先在导管穿入组织处涂抹氰基丙烯酸酯胶水及加速剂，随后涂抹牙科水泥。等待5分钟，使水泥完全固化。
6. 小心取下导管上的帽盖，将带有10 cm延长管的静脉输液三通接头（已连接示踪剂）的雄性端连接至导管。
7. 用手或微量输注泵以100 μL/min的速度缓慢注射示踪剂。随后移除带10 cm延长管的三通静脉输液接头，重新换上帽盖。此时应可见示踪剂在导管基部呈现搏动状。
   注意：若手动注射，应持续注射至示踪剂刚好仍可见于导管管腔内，位置大约在牙科水泥覆盖管壁处上方1–2 mm处。
8. 注射完成后，在颈部下方放置沙袋以维持一定程度的屈曲。随后可松开头部，让动物保持静息的俯卧位。
9. 撤除自持式牵开器，将肌肉复位至其自然位置。使用手术巾钳将皮肤在肌肉上方拉拢闭合。
10. 用纱布覆盖手术巾钳及切口，再覆盖毛毯以减少热量散失。
11. 在示踪剂循环预定时间后，通过静脉注射戊巴比妥钠（140 mg/kg）实施动物安乐死。使用听诊器听诊，确认心音消失后判定动物已死亡。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
18G 针头	Mediq
1 ml 注射器	FischerSci	15849152
20G 套管针	Mediq	NA
22G 套管针	Mediq	NA
牛血清白蛋白 Alexa-Fluor 647 标记物	ThermoFischer	A34785	2 小瓶 (10 mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	C1016
牙科水泥	Agnthos	7508
葡萄糖	Sigmaaldrich	G8270
Insta-Set CA 加速剂	BSI-Inc	BSI-151
静脉留置导管 TAP，三通带 10 cm 延长管	Bbraun	NA
KCl	Sigmaaldrich	P9333
记号笔	NA	NA
MgCl2	Sigmaaldrich	M8266
超纯水	NA	NA
NaCl	Sigmaaldrich	S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	S5761
生理盐水	Mediq	NA
自持式拉钩	NA	NA
超级胶水	NA	NA
外科弯剪	NA	NA
手术巾钳	NA	NA