猪支气管组织提取：从猪肺中分离支气管组织切片的操作流程 关键词：支气管组织, 猪肺, 组织提取, 解剖, 实验动物模型, 呼吸道生物学

摘要

来源：Harrington, N. E. 等 囊性纤维化肺部铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌生物膜的离体抗生素疗效检测。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们介绍了一种从收获的猪肺中提取细支气管组织的外科手术方法。这种离体的细支气管组织可用于建立感染模型，以研究慢性肺部感染。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 离体猪肺（EVPL）组织的解剖

1. 屠宰后应尽快从指定来源获取肺组织，并使用家用冷藏箱运输至实验室，确保组织保持低温。
   注意：屠宰当天获取的肺组织因储存导致的瘀伤较少，但屠宰后在低温储存条件下保存不超过4天的组织也可使用。由于冷藏箱需带入屠宰场或肉店，每次使用后必须根据当地实验室指南进行去污处理，并在不使用时存放于微生物学实验室外，以降低污染风险和防止 containment 泄漏。
2. 在无菌表面并置于火焰下操作，将肺组织放置于覆盖有经高压灭菌铝箔的洁净塑料砧板上。检查细支气管是否保持完整。若肺组织在屠宰场或运输过程中受到任何损伤，则不宜使用。
3. 将刮刀在火焰下加热，然后短暂触碰肺组织中围绕细支气管的区域，以对组织表面进行灭菌。
4. 使用无菌固定式剃刀刀片切除细支气管周围的表面组织。切口应与细支气管平行，以避免造成损伤。
5. 暴露细支气管后，在可见范围内的最高点对细支气管进行横切，使其游离。
6. 用无菌镊子轻轻夹住细支气管的游离端，使用无菌固定式剃刀刀片切除任何残留的不需要的组织。在细支气管出现分支之前，进行最后一次横切，将其从肺组织中完全分离。
7. 将分离的细支气管放入第一份 DMEM/RPMI 1640 清洗液中。将细支气管留在清洗液中，并重复步骤 1.2–1.5，根据需要从同一肺组织中采集足够数量的细支气管组织段。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
70% 乙醇或类似的表面消毒剂，用于解剖器械的火焰灭菌
铝箔——经高压灭菌预消毒——用于覆盖解剖肺组织时所用的砧板
本生灯
砧板——我们建议使用塑料砧板，以便用酒精轻松去污。
用于运输肺脏至实验室的冷藏箱
不同尺寸的解剖剪
杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）
Fisherbrand 2 mL 加强型离心管	赛默飞世尔科技	15545809
大型刮刀
固定式剃须刀片
塑料砧板和铝箔，用于创建无菌且可清洁的解剖操作表面
Roswell Park Memorial Institute（RPMI）1640培养基
镊子的选择（推荐使用钝头镊子）
根据贵机构的健康规定，用于处置受污染的锐器和猪未成熟组织的合适容器 &和安全政策。