猪心室组织切片的制备：一种基于振动切片机的猪心脏组织超薄切片技术

摘要

来源：Ou, Q. 等，生理条件下猪心脏的切片与培养，J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了一种基于振动切片机的方法，用于制备具有活性的猪心脏超薄切片。所获得的组织切片可用于培养，并作为药理学检测的模型系统。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 猪心脏组织切片

1. 在振动切片机上安装组织浴槽，向组织浴槽的冷却夹套中加入冰块，然后向组织浴槽中加入Tyrode's溶液。准备一个1 L的塑料瓶，用于收集组织浴槽冷却夹套融化的冰水。配制1 L切片用Tyrode's溶液：每升溶液中加入3 g/L 2,3-丁二酮单肟（BDM）、140 mM NaCl（8.18 g）、6 mM KCl（0.447 g）、10 mM D-葡萄糖（1.86 g）、10 mM HEPES（2.38 g）、1 mM MgCl₂（0.203 g）、1.2 mM NaH₂PO₄（0.136 g）和2.5 mM CaCl₂（0.277 g）。₂ (1 mL 的 1 M 溶液)，1.8 mM CaCl₂₂ （1.8 mL 1 M 溶液），加 ddH₂O 定容至 1 L₂O. 使用 NaOH 将 pH 调至 7.40。然后使用 1,000 mL、0.22 µm 真空过滤/储存系统过滤溶液，并于 4 °C 下过夜保存。
2. 在生物安全柜内，将猪心转移至含有1 L新鲜冷停跳液的托盘中。配制1 L停跳液：混合110 mM NaCl（6.43 g）、1.2 mM CaCl₂（0.132 g）、5.4 mM KCl（0.401 g）、0.5 mM MgCl₂（0....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂糖	Bioline USA	BIO-41025
2,3-丁二酮单肟（BDM）	Fisher	AC150375000
氯化钙（CaCl2）	Fisher	C79-500
振动切片机用陶瓷刀片	Campden Instruments	7550-1-C
D-葡萄糖	Fisher	D16-1
一次性手术刀 #20	Biologyproducts.com	DS20X
Falcon 细胞筛，无菌，Corning	VWR	21008-952
肝素钠盐	Sigma-Aldrich	H3149-50KU
HEPES	Fisher	BP310-1
Histoacryl BLUE 组织胶	Amazon		https://www.amazon.com/HISTOACRYL-FLEXIBLE-1051260P-Aesculap-Adhesive/dp/B074WB5185/
虹膜弹簧剪	Fisher	NC9019530
虹膜直剪	Fisher	731210
氯化镁（MgCl2）	Fisher	M33-500
氧气调节器	Praxair
氧气瓶	Praxair
塑料巴斯德吸管	Fisher	13-711-48
氯化钾（KCl）	Fisher	AC193780010
矩形剃须刀片	Fisher	12-640
可伸缩手术刀	Fisher	22-079-716
碳酸氢钠（NaHCO3）	Fisher	AC217125000
氯化钠（NaCl）	Fisher	AC327300010
振动切片机	Campden Instruments	7000 SMZ-2