向兔上泪腺眶叶注射：一种诱导干眼病模型的技术

摘要

来源：Honkanen, R. A. 等，通过向泪腺注射刀豆蛋白A建立兔的水样缺乏型干眼病模型：应用于药物疗效研究。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频介绍了通过向兔上泪腺眶叶注射刀豆蛋白A来诱导干眼病模型的方法。该模型可用于研究各种药物治疗干眼病的有效性。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物准备

注意：注射泪腺系统的眶部。

1. 皮下注射 0.2 mg/kg 的乙酰丙嗪对兔子进行镇静。
2. 剪除眶周及头皮区域的毛发，并使用脱毛剂 Nair 彻底清除残留毛发。使皮肤完全光滑，以便更清晰地观察解剖标志，并在超声引导下注射刀豆球蛋白 A（图 1）。
3. 按照上述方法诱导中度镇静。

2. 眶上泪腺（OSLG）注射

注意： OSLG 随之迅速发生。

1. 对眼球施加内侧压力，使下眶上泪腺（OSLG）从后切迹处突出。对眼球施加内侧压力（图2，红色箭头），使OSLG从后切迹处隆起。该隆起可作为粗略定位标志，用于确定后切迹的位置。
2. 使用闭合尖端的弯镊轻压该区域，直至触及颅骨上的骨性开口。此开口呈狭缝状，位于隆起下方，走向为前/后方向。
3. 用镊子施加适度压力，在皮肤上留下压痕，作为针头定位的解剖标志（图3A）。

结果

图1：兔子刀豆蛋白A注射前的准备。 (A) 使用小型剪刀去除毛发，以便更清晰地观察解剖标志，从而识别眶上泪腺。 (B) 使用脱毛膏（Nair）去除剪毛后残留的毛发。

图2：眼眶上泪腺的.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
100 mm 宏镜头	Canon EF 100mm f/2.8L IS USM	3554B002
26 号针头（5/8）	Becton Dickinson and Company,<br/> Franklin Lakes, NJ	305115	用于向<br/> 泪腺注射 ConA 的针头
27 号针头（5/8）	Becton Dickinson and Company,<br/> Franklin Lakes, NJ	305921	用于向<br/> 泪腺注射 ConA 的针头
Aceproinj（乙酰丙嗪）	Henry Schein Animal Health,<br/> Dublin, OH	NDC11695-0079-8	皮下注射 0.1 ml/kg<br/> 用于兔镇静
麻醉蒸发器	VetEquip, Pleasanton, CA	Item #911103
Bishop Harmon 镊子	Bausch and Lomb (Storz),<br/> Bridgewater, NJ	E1500-C	组织镊
卡尺	Bausch and Lomb (Storz),<br/> Bridgewater, NJ	E-2404	用于在 ConA 注射过程中<br/> 测量针头长度的卡尺
刀豆蛋白 A（Concanavalin A）	Sigma, St. Louis, MO	C2010	用 PBS 配制成 5 mg/ml 用于<br/> 向兔泪腺注射
兔，新西兰白兔或<br/> 荷兰带兔（如文中所述）	Charles River Labs, Waltham, MA	2-3 kg	实验动物
手术放大镜 +1.50	Designs for Vision, Bohemia, NY	Specialty item	在观察泪膜破裂及进行<br/> 刀豆蛋白 A（Concanavalin A）<br/> 注射时，提供眼表放大功能<br/> 的设备