猪主动脉分离：从小型猪体内切除胸主动脉用于下游分析的手术操作

摘要

来源：Zhao, Y., 等 微型猪主动脉内皮细胞的分离与培养 J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们演示了从小型猪体内手术切除主动脉的操作步骤。从分离的主动脉中获取的内皮细胞可在体外条件下进一步培养，用于研究凝血和免疫反应。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 猪主动脉内皮细胞分离的手术与准备工作

1. 手术前，使用紫外线照射手术室 1 小时，并用医用消毒剂 84 液（有效氯含量为 4.0% - 5.0%，材料表）进行消毒。
2. 给小型猪肌肉注射由 15 mg/kg 氯胺酮、15 mg/kg 盐酸赛拉嗪和 0.05 mg/kg 盐酸非那西汀组成的混合液（注射体积：100μL/kg，材料表）（图 1A）后，通过检测猪的疼痛反应（例如捏一只耳朵或晃动一条前肢）以及生理指标（例如血压、心率和呼吸频率）确认麻醉状态。
   注意：若猪出现苏醒迹象，可追加半剂量注射。
3. 使用手术刀切开腹部，暴露下腔静脉，随后用 5 mL 注射器将肝素钠（5,000 U，材料表）注入下腔静脉。
4. 5 分钟后，将导管插入腹主动脉放血，切开胸部皮肤并用手术刀切开膈肌，随后剪开左心室。
   注意：放血并剪开心脏后，需检查主动脉脉搏以确认猪已被安乐死。
5. 使用骨钳（材料表）切除肋骨，暴露心脏和肺脏。找到位于心脏和肺脏后方的主动脉，并夹闭其两端。用预冷的洗涤缓冲液——含 1% (v/v) 青霉素/链霉素的 1× PBS 溶液（pH 7.4）冲洗主动脉一次（图 1B,C）。
6. 用剪刀取出主动脉，并保持其两端处于夹闭状态。使用无菌镊子和剪刀去除主动脉周围多余组织。将主动脉放入 50 mL 离心管中，用预冷的洗涤缓冲液清洗 3 次（每次 30 mL），然后将主动脉转移至实验室（图 1D）。

结果

图1：小型猪主动脉的手术过程及切除操作。 (A) 小型猪（巴马猪）的实物照片。(B) 经腹腔和胸腔切开术后暴露主动脉。(C) 在主动脉两端进行夹闭。(D) 将主动脉置于含冷洗涤缓冲液的50 mL试管中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
20 x PBS 溶液（pH 7.4，无核酸酶）	Sangon Biotech 	B540627#
75% 医用酒精	桂林立丰医疗器械有限公司 中国
骨剪	北京和利康创建科技发展有限公司 中国	HL-YGQ
BOON 一次性注射器（10 ml）	江苏益乐医疗器械有限公司 中国
复方氯胺酮注射液	沈阳兽药厂 中国		盐酸氯胺酮：0.3 g/2 ml，盐酸赛拉嗪：0.3 g/2 ml，盐酸非那西汀：1 mg/2 ml
镊子 	上海医疗器械有限公司 中国
肝素钠	江苏万邦生化医药股份有限公司 中国
碘酊	桂林立丰医疗器械有限公司 中国
小型猪（巴马或五指山）	康益生态农业有限公司 中国
青霉素/链霉素 	Life Technologies 	15070063#
剪刀	上海医疗器械有限公司 中国
手术刀	上海医疗器械有限公司 中国	22#