猪主动脉内皮细胞（pAEC）分离：一种基于酶消化法从收获的猪腹主动脉中分离内皮细胞的方法

摘要

来源：Zhao, Y. 等 小型猪主动脉内皮细胞的分离与原代培养。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们演示了使用一步胶原酶消化法从猪模型的腹主动脉中分离内皮细胞。这些内皮细胞可进行培养，用于后续实验应用。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 猪主动脉内皮细胞的分离

1. 在无菌条件下，将猪主动脉从洗涤缓冲液中取出，置于150 mm的培养皿中（图1A）。
2. 用无菌镊子和剪刀小心剪除主动脉的两端，并再次去除主动脉周围的多余组织（图1B）。在室温下的培养皿上方，用20−50 mL洗涤缓冲液冲洗主动脉的内外表面：含1%（v/v）青霉素/链霉素的1×PBS溶液（pH 7.4）。
   注意：尽量仅剪除手术中夹钳夹持区域的组织，因为该区域的内皮细胞可能已受损，同时去除多余组织和动脉侧支。
3. 将外科缝合线穿过主动脉，然后用外科缝合线（5-0，90 cm，材料表）结扎主动脉的一端。将缝合线保留在主动脉内侧（图1C,D）。
4. 用镊子轻轻固定结扎端附近的主动脉，然后缓慢拉动外科缝合线，将主动脉翻转，直至暴露其内皮表面（图1E−G）。
   注意：务必固定结扎端附近的主动脉，且不要夹持过紧，否则无法通过拉动缝合线实现主动脉翻转。
5. 用洗涤缓冲液清洗主动脉内皮表面3次（每次10 mL），然后弃去清洗液....

结果

图1：猪主动脉消化及pAECs的分离。(A) 将主动脉置于含冷洗涤缓冲液的150 mm培养皿中。(B) 去除结缔组织后的猪主动脉照片。(C) 用无菌外科缝线绑住的玻璃棒，用于穿过猪主动脉。(D) 将主动脉一端用无菌外科缝线结扎，并保留在主动脉内侧。<.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
细胞刮刀	Corning	3010#
IV型胶原酶	Sigma-Aldrich	C5138#-1G
DMEM培养基	Life Technologies	11965118#
Falcon 100 mm细胞培养皿	Corning	353003#
培养皿（150 × 15 mm）	Biologixgroup	66-1515#
镊子	上海医疗器械有限公司 中国
带通气盖的斜颈矩形细胞培养瓶（T25）	Corning	3289#
剪刀	上海医疗器械有限公司 中国
血清移液管（10 ml）	JET Biofil	GSP010010#
无菌巴斯德吸管	GeneBrick	GY0025#
外科缝合线	上海浦东金环医用材料有限公司	5-0#
20 × PBS溶液（pH 7.4，无核酸酶）	生工生物工程（上海）股份有限公司	B540627#
青霉素/链霉素 	Life Technologies 	15070063#