通过血管造影评估血管灌注：一种在兔模型中向降主动脉注入造影剂以可视化血管灌注的技术

摘要

来源：Sligar, A. D 等，糖尿病兔后肢缺血的临床前模型。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了通过向兔模型的降主动脉注射造影剂以实现血管造影的技术，用于观察血管灌注情况。该技术有助于理解血管在发生阻塞以及治疗后恢复期间的灌注状态。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术前兔的准备

1. 通过皮下注射给予兔 20–40 mg/kg 氯胺酮和 2 mg/kg 咪达唑仑以进行麻醉。使用面罩在整个初始镇静期间给予 1.5%–3% 异氟烷（通常为 2%）。通过肌肉注射给予 3 mg/kg 阿法沙龙以维持麻醉。
2. 麻醉后，移除面罩并插入带套囊的气管导管至气道，连接呼吸机。继续以 1.5%–3% 浓度给予异氟烷。
3. 从任一侧耳的中央动脉采集血液，用于基线生化检测。
4. 在对侧耳的耳缘静脉置入 22 G 静脉导管，用于手术全程输注乳酸林格氏液滴注。也可使用生理盐水（0.9% 氯化钠）替代。
5. 利用对侧耳的外侧静脉，在静脉内置入导管并以 6 mg/kg/h 的速率输注阿法沙龙。在准备阶段期间，逐渐将阿法沙龙剂量增加至 8 mg/kg/h，同时将异氟烷浓度降低至 0.6%。
6. 为减轻疼痛并降低感染风险，使用 25 G 针头通过皮下注射给予布托啡诺（0.01 mg/kg）和恩诺沙星（5 mg/kg）。
7. 使用剪毛器（#40 刀头）剃除颈部、左右内侧大腿及背部的毛发。背部去毛是为了确保与接地垫保持良好接触。
8. 在每条后肢上放置血压袖带，并测量初始血压。将袖带置于膝关节下方，探头置于外侧踝关节上方。
9. 将兔仰卧位固定于手术台上，对手术区域进行消毒和铺巾。手术区域包括用于颈动脉通路的颈部和用于股动脉通路的右侧内侧大腿。使用 2% 氯己定与 70% 乙醇交替擦拭进行消毒，重复三次，最后喷洒 2% 氯己定溶液。
10. 将已灭菌的 3-mm 不锈钢球置于低密度聚乙烯袋内，放置于右侧（已消毒）腿部大腿上部附近，作为血管造影测量时的尺寸参照。手术前用无菌巾覆盖该腿部。首次血管造影期间，保持钢球置于无菌塑料袋内。

2. 血管造影术

1. 暴露右侧颈总动脉
   1. 使用带有#15刀片的手术刀，在气管外侧做一条4–5 cm长的切口。
   2. 使用钝性分离暴露颈动脉，并用小型韦特兰牵开器撑开切口。仔细分离颈动脉与颈静脉及迷走神经。通常使用弯头梅岑鲍姆剪刀和弯头蚊式止血钳进行钝性分离。务必完全分离颈动脉与神经及颈静脉，以确保结扎时仅结扎动脉。
2. 在暴露的动脉近端和远端分别使用4-0丝线结扎。用外科结加四个方结结扎颈动脉的远端。在近端使用套线环（ligaloop），以便根据需要收紧或放松。在暴露的动脉近端放置套线环有助于固定导入器和导管。
3. 通过静脉注射500 IU肝素。沿暴露的颈动脉使用约0.5 mL的1%利多卡因，以扩张血管。通常一次治疗即足够，但可根据需要重复。使用手术刀或虹膜剪在颈动脉上剪开约一半深度，然后将4英寸导丝插入工具置入动脉。
4. 将一根0.014英寸×185厘米的导丝经插入工具送至降主动脉髂嵴处的主动脉分叉。取出插入工具，沿导丝置入一根3F猪尾血管造影导管。
5. 将猪尾导管向前推进至降主动脉，使其位于髂嵴处主动脉分叉近端2 cm的位置。
6. 将导管尖端置于第七腰椎与第一骶椎之间。通过手动注射2–4 mL造影剂来检测导管位置。
7. 通过导管注射100 μg硝酸甘油以增强血管扩张。
8. 通过导管向兔体内注射0.8 mL的1%利多卡因，以辅助血管造影期间的血管扩张。将注射器的导管连接至导管，并清除管路中的任何气泡。通过导管使用自动血管造影注射器注入8–9 mL造影剂。
9. 使用血管造影技术记录后肢的系列图像。
   1. 将高压注射器设置为以3 mL/sec的速度注射造影剂，总量为8-9 mL。以每秒6帧的速度进行数字减影血管造影。
   2. 选择生成的序列图像，并使用约-40%的设置调整每张血管造影图像，以最小化骨骼显影，完整呈现对比剂灌注下的血管灌注情况。图中显示了股动脉结扎/切除后血管血流的一个血管造影示例。 图1.

结果

图1：糖尿病兔与非糖尿病兔在股动脉结扎并切除术前、术后及术后恢复70天时后肢的血管造影图。（A）缺血肢体（左侧）与对侧对照肢体（右侧）的血管造影图。（B）缺血肢体在结扎部位的放大图像。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
血管造影设备  	Toshiba	Infinix-i
导丝 	Boston Scientific 	39122-01
插入工具   	Merit Medical Systems	MAP550	金属丝插入工具
利多卡因  	McKesson Medical-Surgical	239936
Ligaloop  	V. Mueller	 CH117 / CH116	白色迷你 / 黄色迷你
猪尾导管  	Merit Medical Systems	1310-21-0053	 3F 猪尾导管
丝线缝合线 	Ethicon-Johnson & Johnson	 A183H 	4-0 丝线，18"长
注射泵 	DRE Veterinary		 Versaflow VF-300
Visipaque 对比剂 	McKesson Medical-Surgical	509055
血管造影注射器 	Medrad