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所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 麻醉与插管
- 对动物（三个月大的新西兰白兔，雄性或雌性，每只体重约2.5 kg）进行肌内注射氯胺酮（25 mg/kg，50 mg/mL，0.5 mL/kg）和赛拉嗪（3 mg/kg，20 mg/mL，0.15 mL/kg）以达到镇静效果。等待约20分钟，直至动物进入睡眠状态
深度（完全肌肉失张力）。
注意： 这种预用药将实现简单、快速且无痛的插管过程。深度镇痛和麻醉的诱导方法如步骤1.1.8所述。
- 从耳缘静脉插入静脉（IV）导管，并在气管插管完成前保持关闭。
注意： 该静脉通路将用于输注芬太尼和丙泊酚，分别实现深度镇痛和麻醉（见步骤1.8）。
- 通过纯氧中供给5%七氟烷维持麻醉，直至完成插管。
注意： 仅当动物出现苏醒迹象（如眼球运动、肌肉收缩）时，才需要执行此步骤。
- 用10%利多卡因喷雾对气管进行局部麻醉。将兔置于俯卧位，并保持其头部垂直后伸。
- 将第一根小直径（2.5 mm）气管插管插入兔气管，直至可听到管内有气流声。此操作可打开喉部，便于后续插入正式气管插管。
- 在导管中插入引导管（插管导管），以固定导管在气管内的位置。移除细径导管，并沿引导管插入最终的气管内导管（4.9 mm）。
- 移除引导器，充胀气管导管末端的气囊，以封闭并固定装置于气管内。导管可保持原位，也可用系于前额的系带加以固定。立即使用纯氧中含3%七氟烷对动物进行通气（7 mL/kg，频率40次/分钟）。
- 持续经耳静脉灌注芬太尼（0.01 mg/mL，2–4 mL/h）以诱导镇痛，2–4 mg/kg 的丙泊酚（2%，20 mg/mL，4–8 mL/h）以诱导麻醉，并以 4 mL/kg/h 的醋酸林格液维持等容状态。
- 放置直肠温度探头。在整个过程中持续监测心功能、体温和血氧饱和度。
- 通过监测自主呼吸来控制麻醉深度；若动物出现自主呼吸迹象，给予小剂量的丙泊酚和芬太尼。