建立兔颅骨缺损模型：一种在兔颅骨顶部创建圆形缺损的外科手术方法，用于评估骨替代材料的骨再生能力

摘要

来源：Marger, L. 等，用于评估骨替代材料中骨生长与新生血管形成的兔颅骨骨增量模型。J. Vis. Exp. (2019)。

在本视频中，我们描述了一种用于建立兔颅骨模型的外科手术方法，以评估感兴趣骨样本替代材料的骨再生能力。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术

1. 术前准备
   1. 将兔子置于手术台上，台面铺设加热垫（39 °C）并覆盖床垫垫层（以防烫伤）。剃除头皮毛发。
   2. 在眼睛上涂抹润滑凝胶，防止刺激和干燥。使用聚维酮碘（10%）擦洗皮肤进行消毒。然后用无菌手术巾覆盖兔子，并剪开颅骨暴露区域。
   3. 再次使用聚维酮碘（10%）对手术区域进行消毒。在眼睛上重新涂抹润滑凝胶，防止刺激和干燥。
   4. 准备一张覆盖无菌手术巾的器械台，用于放置完整的手术器械盘。
2. 手术切口开放
   1. 在颅骨区域皮下（SC）注射2%利多卡因（1 mL）进行局部麻醉。
   2. 沿颅顶矢状线方向使用手术刀切开皮肤，从眼眶延伸至枕外隆凸（长约4 cm）。确保骨膜也被切开。
   3. 使用骨膜剥离器轻轻将切口两侧的骨膜抬起。用无菌生理盐水冲洗手术区域。
3. 套管放置
   1. 在颅骨上定位矢状缝和冠状缝（图2A, B）。注意这些解剖线形成一个十字交叉。套管将分别置于该十字划分出的四个象限内，确保套管边缘不覆盖在缝线上（图2C）。
   2. 将第一个套管置于左上象限（左侧额骨），尝试使装置平放。用手施加稳固压力固定位置，并拧入微型螺钉直至感到阻力。确保螺钉头部与套管卡槽表面齐平。
   3. 对另一个卡槽重复相同操作，以将套管牢固固定于颅骨。确保套管与骨面完全密封固定。
   4. 依次在右上象限（右侧额骨）、左下象限（左侧顶骨）和右下象限（右侧顶骨）重复上述操作。
4. 在套管围成区域内钻5个髓内孔（图1）
   1. 使用球形钻头在套管围成区域中心的骨面上，在生理盐水灌注条件下钻一个髓内孔（直径0.8 mm，深度约1 mm）。确保出现出血现象。
   2. 沿两个卡槽螺钉连线的轴线方向，在套管内缘处再钻两个髓内孔；沿垂直轴线方向，在套管内缘处同样钻两个髓内孔。确保每个孔均有出血。
   3. 在其余三个套管区域内重复上述操作。
5. 向套管内填充材料样本并加盖封闭（图3）
   1. 根据制造商说明或材料规格准备所需的骨替代材料。
   2. 将材料样本填满第一个套管至边缘，然后安装盖帽封闭套管。在其余3个套管中重复此过程。
6. 手术部位关闭
   1. 使用间断非可吸收缝线缝合覆盖在套管上方的皮肤。
   2. 在伤口处喷洒可喷涂型敷料。

2. 术后治疗

1. 停止镇痛和麻醉（停止输注丙泊酚和芬太尼），并检查自主呼吸的恢复情况。
2. 动物恢复自主呼吸后停止通气。在完全苏醒前，维持动物吸入纯氧。
3. 皮下注射盐酸丁丙诺啡（0.02 mg/kg，0.03 mg/mL，0.67 mL/kg），术后镇痛每6小时重复注射一次，持续3天。
4. 将动物转移至常规饲养环境，提供水和充足食物。

结果

图1：PEEK圆柱体的规格参数。在侧向稳定片上钻有两个直径为0.8 mm的孔，用于螺钉固定。在圆柱体所限定区域内，颅骨上需钻的5个髓内孔（直径均为0.8 mm）的位置以红色圆圈标出。

图2：兔颅骨及圆柱体放置位置的代表性图像。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
<strong>药物</strong>
芬太尼	Bischel		用于镇痛
Ketalar 50mg/ml	Pfizer		用于麻醉的氯胺酮
Lidohex	Bichsel		眼部润滑凝胶
Opsite	Smith and Nephew	66004978	可喷洒敷料
聚维酮碘 10%，Betadine	Mundipharma		抗感染剂
丙泊酚 2%	Braun	3538710	用于麻醉
Rapidocain 2%	sintetica		局部麻醉
Rompun 2%	Bayer		用于麻醉的赛拉嗪
七氟烷 5%	Abbvie		用于麻醉
<strong>设备</strong>
Fresenius Vial pilot C	Imexmed		输液泵
加热垫	Harvard Apparatus
Suction dominant 50	Medela
Suction tubing Optimus	Promedical	80342.2
外科电机	Schick dental	Qube	用于钻制髓内孔
通气设备	Maquet Servo1
<strong>材料</strong>
圆柱体及盖子	Boutyplast	定制	成分：PEEK（聚醚醚酮）
手动自持式轴	GlobalD	ACT1K
自持式轴的移动手柄	GlobalD	MTM
自攻螺钉	GlobalD	VA1.2KL4	十字驱动螺钉，由钛5级（ISO 5832-3）制成
<strong>手术托盘</strong>
Shiley 气管插管，直径 2.5 mm	Covidien	86233	用于插管
Shiley 气管插管，直径 4.9 mm	Covidien	107-35G	用于插管
Ethicon prolene 4-0	Ethicon	8581H	不可吸收缝线
镊子	Marcel Blanc	BD027R	145 mm
插管导管	Cook medical		插管引导
圆形外科磨头	Patterson	78000	直径 0.8 mm，用于钻制髓内孔
手术刀	Swann-Morton		n&deg;10 和 n&deg;15
剪刀	Marcel Blanc	657	180 mm
Omnifix 注射器	Braun	4616057V	5 ml、10 ml 和 50 ml
Venflon G22	Braun	42690985-01	耳部静脉通路用 Vasofix 安全型留置针