生成骨感染兔模型:一种通过将细菌直接注射到骨髓中来诱导慢性感染的技术

摘要

资料来源:Zhang， Y 等人，在改进的兔骨感染模型中用载万古霉素的硫酸钙和自体骨治疗。J. Vis. Exp. （2019 年）。

本视频介绍了通过使用骨蜡通过手术诱导兔子骨髓中细菌感染以避免细菌泄漏的技术。该兔子模型可用于研究骨感染治疗和骨再生。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 骨感染模型的制备

1. 将 3 个月大的雄性新西兰白兔饲养在单独的笼子中，在空气控制条件 （20 ± 1 °C） 和 12 小时/12 小时明暗照明循环下。每天提供常规饮食和自来水。
2. 确保在手术时兔子的体重超过 3 公斤。
3. 通过腹膜内注射戊巴比妥钠（每 100 克体重 3 毫克）麻醉兔子。确保兔子因对爪子捏没有反应而完全麻醉。在手术过程中将兔子固定在手术台上。
   注意:确保建模过程持续时间小于 1 小时。
4. 使用电动剃须刀逆着毛发生长的方向剃掉胫骨近端区域。使用聚维酮碘溶液对皮肤进行消毒。
5. 用笔和尺子标记胫骨的上端和注射的钻孔位置（到胫骨上端的距离为 1.5 厘米）。确保钻孔位置水平位于胫骨平台的中间（图 1A）。
6. 使用 11 号手术刀切开胫骨皮肤，并在骨膜上做一个 1 cm 的切口（图 1B、C）。使用电动骨钻装置在胫骨上打一个直径为 2 毫米的孔（图 1D）。
7. 用直径为 2 毫米、高度为 2 毫米的骨蜡圆柱体在胫骨平台上压入直径为 2 毫米的孔（图 1E）。沿胫骨平台水平面去除备用骨蜡（图 1F）。检查 2 毫米的孔是否充满骨蜡（图 1G）
   注意: 检查孔洞有无血液溢出，确保孔洞里装满了骨蜡。
8. 在垂直床垫缝合线中用可吸收手术缝合线缝合骨膜和皮肤，以防止动物咀嚼缝合线（图 1H）。
9. 用 1 mL 无菌注射器注射 1 x 10⁸ CFU/mL 金黄色葡萄球菌溶液（每 100 克体重 30 μL）（图 1I）。确保针头穿透骨蜡并将金黄色葡萄球菌溶液缓慢注射到骨髓中。
10. 将动物放在温暖和清洁的环境中，以避免建模后热量损失。监测呼吸频率和心率。醒来后，将兔子关在单独的笼子里，可以免费获得食物和水。

结果

图 1.骨感染模型的手术准备。（A） 显示胫骨上的冲刺位置。注射金黄色葡萄球菌的钻孔位置与胫骨上端的距离为 1.5 厘米。（B） 在皮肤上切开以露出骨膜。（C） 显示通过骨膜切开以露出胫骨。（D） 在胫骨上打一个直径为 2 毫米的孔。（E） 用骨蜡填充直径为 2 mm 的孔。（F） 剪掉备用骨蜡。（G） 显示填充骨缺损的骨蜡。（H） 缝合骨膜和皮肤。（I） 注射金黄色葡萄球菌溶液。

材料