建立骨感染的兔模型：通过直接向骨髓内注射细菌诱导慢性感染的技术 关键词：骨感染，兔模型，慢性感染，骨髓，细菌注射

摘要

来源：Zhang, Y 等，采用载万古霉素硫酸钙联合自体骨在改良兔骨感染模型中的治疗研究。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了一种通过使用骨蜡防止细菌泄漏，在兔骨髓中手术诱导细菌感染的技术。该兔模型可用于研究骨感染治疗和骨再生。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。.

1. 骨感染模型的制备

1. 将3月龄的雄性新西兰白兔饲养在独立笼具中，环境温度控制在（20 ± 1 °C），光照周期为12小时光照/12小时黑暗。每日提供常规饲料和自来水。
2. 确保手术时兔子体重超过3 kg。
3. 通过腹腔注射戊巴比妥钠（每100 g体重3 mg）对兔子进行麻醉。通过捏压兔爪无反应来确认兔子已完全麻醉。在手术过程中将兔子固定于手术台上。
   注意：确保造模操作时间少于1小时。
4. 使用电动剃须刀逆毛发生长方向剃除胫骨近端区域的毛发。用聚维酮碘溶液对皮肤进行消毒。
5. 用笔和尺标记胫骨上端及用于注射金黄色葡萄球菌（S. aureus）的钻孔位置（距胫骨上端1.5 cm）。确保钻孔位置位于胫骨平台水平方向的中点（图1A）。
6. 使用11号手术刀切开胫骨皮肤，并在骨膜上做1 cm切口（图1B, C）。使用电动骨钻在胫骨上钻出直径2 mm的孔（图1D）。
7. 用直径2 mm、高2 mm的骨蜡圆柱体填塞胫骨平台上的2 mm直径孔（图1E）。沿胫骨平台水平面去除多余的骨蜡（图1F）。检查确认2 mm孔内已完全充满骨蜡（图1G）。
   注意：通过观察孔内是否有血液溢出，确认孔内是否已完全填满骨蜡。
8. 使用可吸收缝合线以垂直褥式缝合法缝合骨膜和皮肤，防止动物咬扯缝线（图1H）。
9. 使用1 mL无菌注射器注入浓度为1 × 10⁸ CFU/mL的S. aureus菌液（每100 g体重30 µL）（图1I）。确保针头穿透骨蜡，并缓慢将S. aureus菌液注入骨髓腔内。
10. 造模后将动物置于温暖、清洁的环境中，避免热量散失。监测呼吸频率和心率。待动物苏醒后，将其饲养于独立笼具中，自由摄食饮水。

结果

图1. 骨感染模型的手术准备。 （A）显示胫骨上的钻孔位置。注射S. aureus的钻孔位置距胫骨上端1.5 cm。 （B）在皮肤上做切口以暴露骨膜。 （C）切开骨膜以暴露胫骨。 （D）在胫骨上钻一个直径为2 mm的孔。 （E）用骨蜡完全填满直径为2 mm的孔。 （F）切除多余的骨蜡。 （G）显示骨蜡填充骨缺损的情况。 （H）缝合骨膜和皮肤。 （I

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
可吸收外科缝线 	 Jinghuan	18S0604A
无菌注射器 	 Jinglong	20170501
骨蜡	 ETHICON	 JH5CQLM
电动骨钻装置  	Bao Kang	BKZ-1
电动剃须刀	 Codos	3800
新西兰白兔 	浙江实验动物中心	 SCXK 2014-0047
11号手术刀片 	Yuanlikang 	20170604
戊巴比妥钠  	Merk	2070124
金黄色葡萄球菌冻干粉  	中国普通微生物菌种保藏管理中心	ATCC 6538