兔胚胎解冻：一种用于复苏冷冻保存兔胚胎以进行胚胎移植的升温操作程序

摘要

来源：Garcia-Dominguez, X. 等，兔模型中最佳胚胎阶段的微创胚胎移植与胚胎玻璃化冷冻技术。J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了玻璃化冷冻兔胚胎的解冻程序，以及为实现最佳胚胎复苏效果所采取的预防性操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 胚胎解冻

1. 一步法解冻胚胎。
   1. 将细管水平放置于距离液氮蒸气10 cm处，持续20-30秒。
   2. 当细管内开始出现结晶时，将细管浸入25°C水浴中10-15秒。
   3. 取下细管塞，并剪除棉塞。
   4. 使用配套的微量移液器，将细管内所有内容物排出至含有25°C BM溶液的0.33 M蔗糖溶液培养皿中，孵育5分钟。
      注意：此步骤必须迅速完成，以减少胚胎暴露于玻璃化冷冻溶液的时间。 
   5. 将胚胎转移至另一含有BM溶液的新培养皿中，继续孵育5分钟。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
液氮	Air Liquide	P1505XXX
培养皿，35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
塑料敷料（Nobecutan）	IBOR medica	7140028
塑料细管，0.25 mL	IMV - technologies	6431
剪刀	ROBOZ	RS-5880	任何常规的外科级不锈钢小直剪均可使用。
无菌手套	Alvet Escartí	087GL010075
无菌手术衣	Alvet Escartí	12261501
无菌口罩	Alvet Escartí	058B15924B
细管塞	IMV - technologies	6431
蔗糖	Sigma Aldrich	S7903
水浴锅	RAYPA	BAE-4
杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）	Sigma Aldrich	D5773	不含氯化钙。